三、气相色谱法

气相色谱法适用于食品中叔丁基对羟基茴香醚(BHA), 2,6-二叔丁基对甲基苯酚(BHT)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)的测定。

1．测定原理

样品中的抗氧化剂用有机溶剂提取、凝胶渗透色谱(GPC)净化后，用气相色谱氢火焰离子化检测器检测，采用保留时间定性，外标法定量。

2．试剂和溶液

①石油醚：沸程30～60℃(重蒸)、乙腈(CH₃CN)、丙酮(CH₃COCH₃)。

②乙酸乙酯和环己烷混合溶液(1+1)：量取50mL乙酸乙酯和50mL环己烷混匀。

③ BHA、BHT、TBHQ标准储备液：准确称取BHA(纯度≥99.0%), BHT(纯度≥99.3%), TBHQ(纯度≥99.0%)标准品各50 mg(精确至0.1mg)，用乙酸乙酯和环己烷混合溶液定容至50mL,配制成1mg/mL的储备液，于4℃冰箱中避光保存。

④BHA、BHT、TBHQ标准使用液：分别吸取标准储备液0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于7个10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯和环己烷混合溶液定容，此标准系列的浓度为0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL，现用现配。

3．仪器和设备

气相色谱仪(GC)：配氢火焰离子化检测器(FID)；凝胶渗透色谱仪(GPC)，或可进行脱脂的等效分离装置；分析天平：感量为0.01 g和0.1mg;旋转蒸发仪、涡旋振荡器、粉碎机；有机系滤膜：孔径0.45um。

4．测定步骤

(1)样品制备和处理

①样品制备：固体或半固体样品粉碎混匀，然后用对角线法取四分之二或六分之二，或根据试样情况取有代表性试样，密封保存；液体样品混合均匀，取有代表性试样，密封保存。

②样品处理：油脂样品：混合均匀的油脂样品，过0.45 um滤膜后，准确称取0.5g(精确至0.1 mg)，用乙酸乙酯和环己烷的混合溶液准确定容至10.0mL,混合均匀待净化。

油脂含量较高或中等的样品(油脂含量15％以上的样品)：根据样品中油脂的实际含量，称取5g混合均匀的样品，置于250 mL具塞锥形瓶中，加入适量石油醚，使样品完全浸没，放置过夜，用快速滤纸过滤后，旋转蒸发回收溶剂，得到的油脂用乙酸乙酯和环己烷混合溶液准确定容至10.0mL，混合均匀待净化。

油脂含量少的试样(油脂含量15％以下的样品)和不含油脂的样品(如口香糖等)：称取1g(精确至0.01g)试样于50 mL离心管中，加入5 mL乙腈饱和的正己烷溶液，涡旋1 min充分混匀，浸泡10min。加入5mL饱和氯化钠溶液，用5mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋2min, 3000r/min离心5 min，收集乙腈层于试管中，再重复使用5mL正己烷饱和的乙腈溶液提取2次，合并3次提取液，加0.1％甲酸溶液调节pH至4，待净化。

③净化：上述处理后的样品经凝胶渗透色谱装置净化(凝胶渗透色谱净化条件同“二、高效液相色谱法”)的测定步骤的“④凝胶渗透色谱法处理”，收集流出液蒸发浓缩至近干，用乙酸乙酯和环己烷混合溶液定容至2mL，进气相色谱仪分析。不同试样的前处理需要同时做试样空白试验。

(2)色谱参考条件

①5％苯基-甲基聚硅氧烷毛细管柱，柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25um，或等效色谱柱。

②进样口温度：230℃。

③升温程序：初始柱温80℃，保持1 min，以10℃ /min升温至250℃，保持5 min。

④检测器温度：250℃；进样量：1uL；进样方式：不分流进样。

⑤载气：氮气，纯度≥99.999%，流速1 mumin。

(3)将标准系列工作液分别注入气相色谱仪中，测定相应的抗氧化剂，以标准工作液的浓度为横坐标，以响应值(峰面积、峰高、吸收值等)为纵坐标，绘制标准曲线。

(4)样品溶液的测定将试样溶液注入气相色谱仪中，得到相应抗氧化剂的响应值，根据标准曲线得到待测液中相应抗氧化剂的浓度。

5．结果计算

式中X—试样中抗氧化剂含量，mg/kg;

P—从标准曲线上得到的抗氧化剂溶液浓度，ug/mL;

V—样液最终定容体积，mL ;

m—称取的试样质量，g。

结果保留三位有效数字(或保留到小数点后两位)。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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