一、案例

目前市场上有众多氨基酸保健食品，随着人们生活水平的不断提高，氨基酸类保健食品逐渐成为保健品市场的畅销产品，人体氨基酸模式决定了人们对不同氨基酸的需要量不同,如何能够更好地吸收保健食品中的氨基酸，防止必需氨基酸补充的不合理，需要我们对食品中不同种类的氨基酸含量进行测定，很多国家和地区都采用氨基酸自动分析仪法对食品中各类氨基酸进行定量分析。

二、选用的国家标准

GB／T 5009．124—2003食品中氨基酸的测定——自动分析仪测定法。

三、测定方法

1．试样处理

试样用匀浆机匀浆后在低温冰箱中冷冻保存，需要时解冻使用。

2．称样

准确称取匀浆好的试样，试样蛋白质含量在10～20mg范围内。

3．水解

在水解管中加入6mOl／L盐酸10～20mL，含水量高的试样可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中冷冻3～5min，然后连接真空泵，抽真空后充入高纯氮气，反复三次拧紧螺丝盖，将充满氮气封口的水解管放在(110±1)℃恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。过滤水解液，多次冲洗水解管，将水解液移入50ml容量瓶中定容，吸取1ml。滤液于5mL容量瓶中，用真空干燥器在40～50℃下干燥，残留物用1～2mL水溶解，再干燥，反复两次，最后蒸干，用1mlpH一2．2的缓冲溶液溶解，待测。

4．测定

准确吸取0．200mL混合氨基酸标准溶液，用pH=2．2的缓冲溶液稀释到5mL，此标准溶液稀释浓度为5．00mol／μL，作为测定用的氨基酸标准溶液，用氨基酸自动分析仪以外标法测定试样液的氨基酸含量。

5．结果计算

X=C*1/50*F*V*m/m*109*100

式中 X——试样氨基酸的含量，g／100g；

f一一试样测定液中氨基酸的含量，nmol，。50"L；
F——试样稀释倍数；
V——水解后试样定容体积，mL；
M——氨基酸的相对分子质量；
m——试样质量，g；
1／50——一折算成每毫升试样测定的氨基酸含量．μmol／l；
10⁹一将试样含量由纳克折算成克的系数。

6．标准图谱

如表1所示。
表1氨基酸出峰顺序及保留时间

7．试剂

①浓盐酸。

②6mol／L浓盐酸：浓盐酸与水1+1混合。

③苯酚：需重蒸馏。

④0.0025mol／l混合氨基酸标准溶液。

⑤缓冲溶液：pH一2．2的柠檬酸钠缓冲溶液，pH一3．3的柠檬酸钠缓冲溶液，pH一4．0的柠檬酸钠缓冲溶液，pH一6．4的柠檬酸钠缓冲溶液。

⑥茚三酮溶液。

a．pH=5．2的乙酸锂溶液：氢氧化锂(LiOH·H2 O)168g，加冰乙酸279mL，加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50Og／L氢氧化钠溶液调至pH一5.2。

b．茚三酮溶液：取150mL二甲基枫(C2 H6OS)和乙酸锂溶液50mL加入4g水和茚三酮(C9H4O3·H2O及0.12g还原茚三酮(C18H10O6·2H2O)搅拌至完全溶解。

⑦高纯氮气：纯度99．99％。

⑧冷冻剂：市售食盐与冰1+3混合。

8．实验仪器

①真空泵。

②恒温干燥箱。

③水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30mL，用去离子水冲洗干净并烘干。

④真空干燥器。

⑤氨基酸自动分析仪。