一、概述

(一)理化性质

玉米赤霉烯酮(ZEN)属二羟基苯甲酸内酯类真菌代谢产物，分子式为C₁₈H₂₂O₅，相对分子质量318.36，熔点164～165℃，化学结构式如下。

ZEN有许多种衍生物，如a-玉米赤霉烯醇(cx-zearalenol, a-ZOL),β-玉米赤霉烯醇(β-zearalenol ,β-ZOL)、玉米赤霉酮(zearalanone, ZAN),a-玉米赤霉醇(a-zearalanol,a-ZAL),β-玉米赤霉醇(β-zearalanol,β-ZAL)等。ZEN为白色结晶化合物，熔点164～165℃。溶于碱性水溶液、乙醚、苯、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和酸类，微溶于石油醚，不溶于水、二硫化碳和四氯化碳。ZEN对热稳定，110℃ 1小时以上才能完全破坏。在碱性条件下，ZEN结构中的内酯键可以打开，随着碱浓度的降低，酯键又可以恢复。

(二)主要来源

ZEN主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、三线镰刀菌、大刀镰刀菌等菌种也可以产生此种毒素二由于禾谷镰刀菌、大刀镰刀菌等也是DON的产毒菌株，因此，ZEN往往与DON共同存在于污染的食物中。ZEN主要污染玉米、小麦、大麦、燕麦、大米、小米等。玉米的阳性检出率可达45%，小麦的阳性检出率可达20%。

(三)毒性与危害

大鼠、雏鸡口服ZEN的半数致死量为2g/kg以上，因此，ZEA引起的急性毒性少见。ZEA具有类雌激素作用，主要作用于生殖系统。当ZEN剂量低于1～5mg/kg时，就能引起雄性猪仔睾丸萎缩、乳腺增大等雌性样改变。牛、羊等反刍类动物却能一定程度上抵抗ZEA的毒性，可能是胃内微生物将ZEN代谢成低毒化合物的原因。ZEN酮基还原，形成a-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇两种代谢产物，a-玉米赤霉烯醇比ZEN的雌激素样作用更强。

(四)分析方法

玉米赤霉烯酮的检测方法主要有：高效液相色谱法(GB/T 23504 , GB/T 5009.209、SN/T1772)、荧光光度法(SN/T 1745)。两种方法需要利用ZEA免疫亲和层析柱对样品提取液进行净化，而且荧光光度法需要进一步衍生化后才能检测。

二、免疫亲和层析净化-高效液相色谱法

1. 原理试样中玉米赤霉烯酮用乙腈水溶液提取，提取液经ZEN免疫亲和层析柱净化，甲醇洗脱后进样，高效液相色谱分离，荧光检测器检测，标准曲线法定量。

2．分析步骤

(1)样品提取：粮食及其制品粉碎、过筛，加入氯化钠，用乙腈-水(9+1)高速搅拌提取，滤纸过滤，滤液进一步用玻璃纤维滤纸过滤至澄清；酱油、醋、酱及其制品直接加乙腈超声波提取，滤液分别用滤纸、玻璃纤维滤纸过滤至澄清；酒(含气酒样需预先脱气处理)类试样加乙腈摇匀，取适量乙腈提取溶液经玻璃纤维滤纸过滤。

(2)净化：将净化柱连接在玻璃注射器下，提取液以1滴/秒速度通过净化柱，用pH7.0的磷酸盐清洗缓冲液、水依次冲洗，控制流速1～2滴/秒。流出液弃去，并抽干小柱。

(3)洗脱：用甲醇洗脱结合在亲和柱上的ZEN，供色谱检测用。

(4)测定：色谱参考条件为C₁₈色谱柱(150mm×4.6mm, 5um)；柱温35℃；流动相为乙腈-甲醇-水(46+8+46)，流速1.0ml/min；检测波长λ_ex：274nm,λ_em：440nm。

3．方法说明

(1)粮食及其制品、酒类样品的检出限为20ug/kg ,酱油、醋、酱及其制品类样品的检出限为50ug/kg；玉米、小麦等谷物类样品的检出限为5ug/kg；大豆、油菜籽和植物油的检出限为10ug/kg。

(2)选择亲和柱净化样品提取液时，要考虑亲和柱对真菌毒素的最大负荷量。滤液过柱时，针对不同的样品选择合适的溶剂洗涤净化柱。粮食、酒类、酱类选择pH7.0磷酸盐淋洗液，大豆、油菜籽和植物油选择含0.1％吐温-20的pH 7.0磷酸盐淋洗液，玉米、小麦等谷物的滤液直接用水洗涤。

三、免疫亲和柱净化-荧光光度法

1．原理试样中玉米赤霉烯酮(ZEN)用乙腈-水溶液提取、ZEN免疫亲和柱净化，甲醇洗脱，洗脱液经氯化铝衍生化后，在激发波长360nm、发射波长450nm处测定衍生产物的荧光强度，与标准比较定量。

2．分析步骤

(1)样品处理：大豆(磨细)、油菜籽或植物油试样与氯化钠混合，加入乙腈-水(9+1)溶液高速搅拌提取，滤纸过滤后，取适量滤液用含0.1％吐温-20的pH 7.0磷酸盐缓冲液稀释，玻璃纤维滤纸过滤至澄清。取澄清滤液同免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定ZEA的净化、洗脱操作步骤，甲醇洗脱液供衍生化用。

(2)测定：用硫酸奎宁标准溶液校正荧光分光光度计后，取样品洗脱液适量，加入氯化铝甲醇溶液，立即在激发波长360nm、发射波长450nm波长下，测定试样溶液荧光强度值，与标准比较定量。

3．方法说明ZEN的荧光本身很微弱，用三氯化铝处理后，能显示较强的蓝色荧光。本方法检测大豆、油菜籽和植物油中ZEN的检出限为10ug/kg。

文章来源：《食品理化检验》

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