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一、概述
(一)理化性质
T-2毒素(T-2toxin)是倍半萜烯化合物,属单端孢霉烯族化合物中A型化合物。T-2毒素为白色针状结晶,分子式为C24H34O9,相对分子质量466.52,易溶于三氯甲烷、丙酮、二甲亚砜、甲醇、乙醇、丙二醇和乙酸乙酯,难溶于水和石油醚。在室温下非常稳定,放置6~7年或加热至100~120℃ 1小时毒性不减。其分子中含酯基,与碱作用可以生成相应的醇。T-2毒素结构式如下:
(二)主要来源
T-2毒素是镰孢菌属中的三线镰刀菌、拟枝孢镰刀菌和梨孢镰刀菌的代谢产物。主要污染玉米、黑麦,其次是大麦、大米、小麦。镰刀菌产毒与温度、湿度和环境酸碱度关系非常密切,环境温度、湿度变化大时容易产毒;湿度高、酸性环境时产毒多。
(三)毒性与危害
T-2毒素是单端孢霉烯族化合物中毒性最大的一种真菌毒素,主要危害消化系统、神经系统和生殖系统。T-2毒素经口、皮肤、注射等接触方式都可以引起造血、淋巴、胃肠组织及皮肤的损害。此外,我国某些地区克山病、食管癌和大骨节病的高发病率与T-2毒素有关。猪、牛、羊等家畜对T-2毒素敏感,反刍动物对T-2毒素的耐受性要强,可能是瘤胃微生物对其降解所致。
(四)分析方法
检测T-2毒素的方法主要有:免疫亲和层析净化高效液相色谱法(GB/T 23501, SN/T1771),适用于粮食、粮食制品等食品中T-2毒素的测定,该法在色谱分析前需要将T-2毒素进行衍生化处理;酶联免疫吸附法(GBIT 5009.118, SN/F 2676)适用谷物或粮谷中T-2毒素的测定,方法灵敏度高,操作简单,但需严格实验操作步骤;饲料中的T-2毒素、黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的同时测定可以采用液相色谱-质谱/质谱法检测。
二、竞争性酶联免疫吸附测定法
1.原理样品用甲醇-水提取,提取液中T-2毒素与T-2毒素酶标记物竞争结合包被在微孔板上的抗体,形成抗原抗体复合物,洗涤未结合的T-2毒素和T-2毒素酶标记物,加入反应底物,酶催化底物而显色,通过酶标检测仪,测定有色产物的吸光度值,标准曲线法定量。
2.分析步骤
(1)样品处理:取粉碎、过筛的样品,加甲醇-水(7+3)混匀样品、离心,滤液稀释后进行酶联免疫测定。
(2)测定:在包被有抗体的微孔板中,加入相同体积不同浓度的T-2毒素标准溶液及样品溶液,向各孔中加入等体积的T-2毒素酶标记物,混匀,再依次加入等体积的T-2毒素抗体,于室温避光孵育1小时,洗去未结合的T-2毒素和T-2毒素酶标记物及游离的抗原抗体复合物,加入底物,酶催化底物而显色,用终止液终止反应,于波长450nm处测定吸光度值,绘制标准曲线,根据样品吸光度值,计算样品中T-2毒素含量。
3.方法说明竞争性结合前,必须将T-2毒素与T-2毒素酶标记物混匀。试样中T-2毒素含量越高,与微孔上抗体结合的T-2毒素越多,则微孔内催化底物显色的酶越少,显色越浅。试剂盒在2~8℃保存,用前需在室温(20~24℃)下平衡。
试样中T-2毒素含量大于限定值时,需用其他方法确证。本方法检出限为3.5ug/kg,适用谷物或粮谷中T-2毒素的测定。
相关链接:脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇检验
文章来源:《食品理化检验》
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