5 仪器和设备

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)

5.2 分析天平：感量0.01mg和0.01g。

5.3 固相萃取真空装置。

5.4 均质器。

5.5 旋转蒸发器。

5.6 离心机。

5.7 微量注射器：50uL。

5.8 氮气吹干仪。

5.9 旋涡混合器。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

6.1.1 牛奶：取有代表性试样约500g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。

6.1.2 奶粉：取有代表性试样约500g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。准确称取12g乳粉试样(精确到0.01g)于250 mL烧杯中，少量多次加入50 mL煮沸并冷却到60℃左右的水溶解，冷却至室温后，移入100 mL容量瓶中，用少量水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移入容量瓶，再用水定容到刻度，混匀，制备成奶粉复原乳试样。

6.2 试样的保存

将试样于4℃保存。

7 测定步骤

7.1 提取

准确称取5g牛奶试样(精确到0.01g)或量取5.00 mL奶粉复原乳试样(6.1.2)于50 mL离心管中，依次加入10 mL乙酸缓冲溶液(4.8),15 mL甲醇(4.1)和10 mL甲醇饱和正己烷(4.10)，用均质器以15000 r/min提取1 min，并用约2 mL甲醇(4.1)淋洗均质器，用离心机在4℃以10000r/min离心10 min，弃去上层正己烷层，清液转入鸡心瓶中，在40℃下旋转蒸发至体积小于10 mL，待净化。

7.2 净化

将上述浓缩液以小于等于3 mL/min的速度通过预先活化好的固相萃取柱(4.15)，依次用5 mL水、3 mL 30％的甲醇水溶液(4.9)和5 mL正己烷(4.3)淋洗固相萃取柱，弃去全部淋洗液。减压抽干1 min，然后用6 mL甲醇(4.1)洗脱。洗脱液在低于40℃氮气吹干至体积小于2 mL，用甲醇(4.1)定容至 2.00 mL，混匀后，过0.2 um有机相滤膜(4.16)，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 阴性样品提取液的制备

取不含氢化泼尼松的阴性牛奶或者奶粉样品，按7.1和7.2步骤制备阴性样品提取液，用于配制氢化泼尼松基质标准工作溶液。

7.4 测定条件

7.4.1 液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱：Acquity UPLC TM BEH C₁₈,1.7 um,100 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)柱温：35℃；

c)进样量：5 uL;

d)流动相及流速见表1。

表1 液相色谱梯度洗脱条件

7.4.2质谱参考条件

质谱参考条件如下：

a)离子源：电喷雾离子源(ESI) ;

b)扫描方式：负离子扫描；

c)检测方式：多反应监测(MRM) ;

d)锥孔电压：23V;

e)毛细管电压：3.00 kV;

f)离子源温度：110℃；

g)脱溶剂气温度：400℃；

h)脱溶剂气流：400L/h;

i)锥孔气流量：50L/h;

j)碰撞气压力：0.36Pa;

k)碰撞气：氢气；

1)氢化泼尼松定性离子对、定量离子对、碰撞能量及驻留时间见表2。

表2 氢化泼尼松定量离子对、定性离子对、碰撞能量及驻留时间

相关链接：牛奶和奶粉中氢化泼尼松残留量的测定（一）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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