5 仪器

5.1 高效液相色谱仪配有柱后衍生装置和荧光检测器。

5.2 旋转蒸发器。

5.3 真空泵：真空度应达到80 kPa。

5.4 pH计：测量精度±0.02

5.5 液体混匀器。

5.6 真空固相萃取装置。

5.7 储液器：50 mL。

5.8 鸡心瓶：150 mL。

5.9 平底烧瓶：200 mL。

5.10 微量进样器：100 uL。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5 kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并标明标记。

6.2 试样的保存

将试样于常温下保存。

7 分析步骤

7.1 提取

称取10g试样，精确到0.01g，置于150 mL三角瓶中。加入25 mL磷酸溶液(4.15)，在液体混匀器上高速混合5 min，使试样完全溶解。

7.2 净化

7.2.1 阳离子交换柱净化

在储液器底部塞入少许玻璃棉(4.14)并用适量水冲洗后，装在预洗好的苯磺酸固相萃取柱(4.12)上。把样液(7.1)移入储液器。在真空萃取装置上，使样液以1.5mL/min的流速通过苯磺酸固相萃取柱。分别用5 mL磷酸溶液和10 mL水淋洗固相萃取柱，弃去全部淋出液。用30 mL磷酸盐缓冲溶液(4.16)，以1.5 mL/min的流速洗脱链霉素于200 mL平底烧瓶中。在洗脱液中加入3 mL庚烷磺酸钠溶液(4.18)，摇匀。再用磷酸调节洗脱液pH=2。

7.2.2 C₁₈固相萃取柱净化

将储液器装在预洗好的C₁₈固相萃取柱(4.13)上。将上述洗脱液(7.2.1)移入储液器中。在真空萃取装置上，使洗脱液以1.5 mL/min的流速通过C₁₈固相萃取柱。用5mL磷酸溶液淋洗C18固相萃取柱，在真空泵65 kPa负压下，减压抽干5 min。再用4 mL叔丁基甲醚-正己烷混合溶液(4.20)淋洗C₁₈固相萃取柱，同样减压抽干5 min，弃去全部淋出液。用10 mL甲醇以1.5 mL/min的流速洗脱链霉素到150 mL鸡心瓶中，用旋转蒸发器于45℃水浴上将其减压蒸发至干。加入1.0 mL庚烷磺酸钠溶液(4.19)溶解残渣，溶液供液相色谱测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：Hypersil 5um, C₁₈柱，150 mm×4.6 mm(内径)或相当者；

b)流动相：称取1.10g庚烷磺酸钠和0.052 g 1,2-萘醌-4-磺酸钠(4.10)溶于500 mL乙脂＋水混合液(27+73)中，摇匀。用乙酸(4.4)调节溶液pH=3.3。通过调整乙腈比例，使链霉素出峰时间在9min左右。当天配制；

c)流动相流速：1.0 mL/min;

d)检测器波长：激发波长263nm，发射波长435 nm;

e)色谱柱温度：50℃；

f)衍生管10m×0.25mm(内径)，不锈钢管；

g)衍生剂：氢氧化钠溶液(4.17)；

h)衍生管温度：50℃；

i)衍生剂流速：0.4 mL/min;

J)进样量:80 uL。

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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