5 仪器

5.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。

5.2 固相萃取真空装置。

5.3 旋转蒸发器。

5.4 冷却吸气机。

5.5 液体混匀器。

5.6 分析天平：感量0.1mg，0.01g。

5.7 冷热恒温水浴：精度±0.5℃。

5.8 真空泵。

5.9 微量注射器：25 uL，100uL。

5.10 移液器：0.2mL，1 mL，2mL。

5.11 鸡心瓶：150 mL。

5.12 样品瓶：2 mL，带聚四氟乙烯旋盖。

5.13 玻璃贮液器：50 mL。

5.14 pH计：测量精度±0.02。

6 试样制备与保存

6.1 试样的制备

对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5 kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并标明标记。

6.2 试样的保存

将试样于常温下保存。

7 测定步骤

7.1 提取

称取5g试样，精确至0.01g。置于150 mL三角瓶中，加入25 mL磷酸溶液(4.11)，于液体混匀器上快速混匀1 min，使试样完全溶解。

7.2 净化

将塞有玻璃棉塞的玻璃贮液器连到阳离子交换柱上，把样液(7.1)倒入玻璃贮液器中，在减压情况下使样液以镇3 mL/min的流速通过苯磺酸型阳离子交换柱，待样液完全流出后，分别用5 mL磷酸溶液和5 mL水洗柱，弃去全部流出液。最后用40 mL磷酸盐缓冲溶液(4.12)洗脱，收集洗脱液于100 mL平底烧瓶中。在洗脱液中加入1.5 mL庚烷磺酸钠溶液(4.13)，然后用磷酸(4.3)调至pH=6。

按上述方法将调好pH的洗脱液过Oasis HLB或相当的固相萃取柱，调节流速≤3mL/min，待洗脱液完全流出后，再用3 mL水洗柱，弃去全部流出液。在65 kPa负压下，减压抽干5 min，最后用10 mL甲醇(4.1)洗脱，洗脱液收集于150 mL鸡心瓶中。用旋转蒸发器于45℃水浴中减压蒸发至干。准确加入1.0 mL盐酸溶液(4.14)溶解残渣，待衍生。

7.3 衍生化

用1 mL移液器准确移取0.5 mL样品溶液(7.2)或标准溶液，放入2 mL样品瓶中，加入0.5 mL乙酸钠缓冲溶液(4.15)，拧好旋盖，摇匀。再加入0.2 mL荧光胺丙酮溶液(4.16)，再拧好旋盖，摇匀，放入18℃水浴中衍生30 min。衍生后的样品溶液用液相色谱-荧光检测器测定。

7.4 色谱测定

7.4.1 液相色谱条件

a)色谱柱：Symmetry Shield ^TM PR18,5 um，3.9 mm×150 mm或相当者；

b)流动相：乙腈+0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(27+73)；

c)流速：1.0mL/min;

d)检测波长：激发波长405 nm，发射波长495 nm;

e)柱温：55℃；

f)进样量：100uL。

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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