7 测定步骤

7.1 提取

称取5g试样，精确到0.01g。置于50 mL具塞离心管中，加入5 mL水，于液体混匀器上快速混合1 min，使试样完全溶解。准确加入15 mL乙酸乙酯，在振荡器上振荡10 min，以3000r/min离心10 min，准确吸取上层乙酸乙酯12 mL转入自动浓缩仪的蒸发管中，用自动浓缩仪在55℃减压蒸干，加入5 mL水溶解残渣，待净化。

7.2 净化

将提取液(7.1)倒入下接Oasis HLB柱(4.6)的贮液器中，溶液以小于等于3 mL/min的流速通过Oasis HLB固相萃取柱，待溶液完全流出后，用2×5 mL水洗蒸发管和贮液管并过柱，然后再用5 mL乙腈＋水(4.5)洗柱，弃去全部淋出液。在65 kPa的负压下，减压抽干10 min，最后用5 mL乙酸乙酯(4.4)洗脱，收集洗脱液于10 mL刻度离心管(5.11)中，于50℃用氮气吹干仪吹干，用乙腈＋水(20+80)定容至0.8 mL，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：Pinnacle ⅡC₁₈, 5 um, 150 mm×2.1 mm(i.d)或相当者；

b)流动相：乙腈＋水(20+80)；

c)流速：0.2 mL/min;

d)柱温：30℃；

e)进样量：40 uL。

7.3.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：负离子扫描；

c)检测方式：多反应监测；

d)电喷雾电压：-4500V;

e)雾化气压力：0.069 MPa;

f)气帘气压力：0.069 MPa;

g)辅助气流速：6 L/min;

h)离子源温度：450℃；

i)去簇电压：-55V;

J)定性离子对、定量离子对和碰撞气能量：

7.3.3液相色谱-串联质谱测定

氯霉素标准工作溶液(4.9)在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标，绘制七点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中氯霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。

7.4 平行试验

按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。

7.5 空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤进行。

8 结果计算

结果按式(1)计算：

式中：

X—试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

c—从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V—样品溶液定容体积，单位为毫升(mL);

m—样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。

注：计算结果应扣除空白值。

9 精密度

本部分的精密度数据是按照GB/T 6379的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95％的可信度来计算。

9.1 重复性

在重复性条件下，蜂蜜中氯霉素的含量在0.1ug/kg～4.0ug/kg范围内，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r)，本部分的重复性限按方程式(2)计算：

lgr＝0.972 91gm-1.007 0······(2)

式中：

m—两次测定值的平均值，单位为微克每千克(ug/kg)。

如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。

9.2再现性

在再现性条件下，蜂蜜中氯霉素的含量在0.1ug/kg～4.0ug/kg范围内，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，本部分再现性限按方程式(3)计算：

1gR＝1.032 21gm-0.797 9······(3)

式中：

m—两次测定值的平均值，单位为微克每千克(ug/kg)。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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