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免疫分析法(immunoassay,IA)是利用抗原与抗体的特异性结合作用来选择性识别和测定可以作为抗体或抗原的待测物的一种技术。
免疫分析法起始于20世纪50年代,首先应用于体液大分子物质的分析,1960年,美国学者Yalow和Berson等将放射性同位素示踪技术和免疫反应结合起来测定糖尿病人血浆中的胰岛素浓度,开创了放射免疫分析方法的先河。尔后相继出现了竞争蛋白结合分析、免疫放射分析和受体结合分析,以及以酶、荧光素、化学发光和生物发光等非放射性标记的免疫分析。
在食品安全领域,利用免疫学检测技术可检测细菌、病毒、真菌、各种毒素、寄生虫等,还可用于蛋白质、激素、其他生理活性物质、药物残留、农药残留等的检测,免疫学分析技术已成为食品检验技术中的一个重要组成部分。本章主要介绍酶免疫、荧光免疫、放射免疫和胶体金免疫标记技术。
在抗原一抗体反应条件的优化过程中,其中酶标抗体使用的稀释液是试验的重点,大多是在磷酸缓冲液(PBS),如PBST、PBST一1 BSA、PBST一OOBSA一4%oPEG6000。每一种方法的研究其最终结果体现在检测灵敏度,即该方法对被检物质的最低检出量。
ELISA测定方法
要使ELISA测定得到准确的结果,不论是定性还是定量,都必须严格按照规定的方法制备试剂和实施测定。
在操作过程中,应力求各个步骤操作的标准化,包括加样、保温、洗涤、比色等。主要试剂的制备以及其他一般性试剂,如包被缓冲液、洗涤液、标本稀释液、结合物稀释液、底物工作液和酶反应终止液等,配制时不可掉以轻心。缓冲液可于冰箱中短期保存,使用前应观察是否变质。蒸馏水的质量在ELISA中也至关重要,最好使用新鲜重蒸馏的。不合格的蒸馏水可使空白值升高。
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