3.4 测定步骤

3.4.1 提取及净化

3.4.1.1 罗汉果、桂皮：称取混匀试样5g，装入滤纸筒中，置于脂肪提取器内，加入石油醚40 mL提取4h(回流速度每5～6 min一次)。将接收瓶中的石油醚提取液倒入250 mL分液漏斗中，用10～15mL石油醚洗涤接收瓶三次，合并提取液再加石油醚定容至100 mL。

向提取液中加入浓硫酸10 mL，轻轻振摇，待打开活塞无气体冲出后，再振摇1 min。静置分层。弃去酸层，重复净化3-4次，至酸层呈无色或淡黄色止。用硫酸钠水溶液100 mL洗涤石油醚层，放去水层，然后通过无水硫酸钠柱脱水，用15 mL石油醚分3次洗涤无水硫酸钠柱，收集于瓶中。

3.4.1.2 杜仲：称取混匀的试样5.0g,装入滤纸筒内，上面覆盖少许脱脂棉，滴加约10滴用石油醚处理过的蒸馏水于滤纸筒中，然后置于提取器内，加入100 mL丙酮-石油醚(2+8)混合液在水浴上提取4h(回流速度每小时6～10次)。

将提取液趁热倒入分液漏斗中，对提取瓶壁上的粘附物，用少许丙酮使其溶解倒入分液漏斗中，再用少量石油醚洗涤三次，合并于分液漏斗内，加入热的(40～50℃)硫酸钠水溶液100 mL，振摇1 min静置分层，将水层放入另一分液漏斗中，加30 mL石油醚提取一次，放出水层，将两次的石油醚提取液通过5 cm高的无水硫酸钠柱脱水于另一分液漏斗中，加入浓硫酸10 mL,静置5 miry后轻摇并注意放气，再振摇1 min，静置过夜，弃去酸液。再如上重复净化两次，然后加硫酸钠水溶液洗涤石油醚液三次(每次100 mL)，振摇1 min，静置分层，放去水层，将石油醚液通过无水硫酸钠柱脱水，用少量石油醚洗涤无水硫酸钠柱三次，收于瓶中。

3.4.1.3 田七：称取混匀的试样5.0 g，装入滤纸筒内，置于脂肪提取器内，加丙酮-石油醚(2+8)混合溶剂100 mL，在水浴锅上提取6h(每小时回流10～12次)在原脂肪提取器内将提取液燕发至约40 mL。

将脂肪瓶中的提取液小心倒入分液漏斗中，原脂肪瓶用石油醚洗涤数次，并入提取液中，加入石油醚使提取液总体积约为100 mL，向提取液中加入浓硫酸10 mL,轻轻摇动将分液漏斗倒置，待打开活塞无气体冲出后，振摇半分钟，静置分层，放去下层酸液，再从分液漏斗上口将石油醚转入另一分液漏斗中，原分液漏斗用10 mL石油醚洗涤一次，合并石油醚液。再重复净化1～2次(净化至下层酸液呈无色)，每次振摇0.5 min，放去下层酸液，用硫酸钠溶液洗涤两次(每次100 mL),静置分层后，放去水层，然后，通过无水硫酸钠柱脱水，用少量石油醚洗涤无水硫酸钠柱三次，收于瓶中。

3.4.2 测定

3.4.2.1 色谱条件

a．色谱柱：玻璃柱：2 m×3 mm(内径)，色谱柱填充物(可任选下列一种)；

柱Ⅰ：1.6% (m/m)OV-17+6.4% (m/m)OV-210混合液涂于Gas Chrom Q(80～100目)。

柱Ⅱ：2.5%(m/m)OV-17+3.3％(m/m)QF-1混合液涂于Chromosorb W AW-DMCS (80～100目)。

柱Ⅲ：1.38%(m/m)OV-17+4.62％(m/m)QF-1混合液涂于Diatomite C AW-DMCS (80～90目)。

b．载气：高纯氮，纯度＞99.99％，60 mL/min ;

c．柱温：190℃；

d．进样口温度：225℃；

e．检测器温度：280℃。

也可采用下列条件：

a．载气：10％甲烷/氢，60 mL/min;

b．柱温：200℃；

c．进样口温度：250℃;

d．检测器温度：250℃。

3.4.2.2 色谱测定

视样品中农药组分含量多少，将净化液稀释或浓缩，并定量加入内标物标准溶液，然后选择与样品溶液中农药含量情况相近的标准工作溶液及样液同时进行色谱测定。

注：①出峰顺序为甲体-六六六、丙体-六六六、丁体-六六六、环氧七氯、对,对气滴滴依、邻,对-滴滴梯、对,对'-滴滴滴、对,对'-滴滴涕。

②混合标准工作溶液及样液中各农药组分及内标物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。

3.4.3 空白试验：按上述步骤进行。

3.4.4 结果计算：用色谱数据处理机按适当程序计算各种农药残留量，也可按下式分别计算。

式中：h—样液中农药的峰高,mm；

h'—混合标准工作溶液中农药的峰高,mm；

h'_i—混合标准工作溶液中内标物的峰高，mm；

h_i—样液中内标物的峰高,mm；

c'—混合标难工作溶液中农药的浓度，ng/uL；

c'_i—混合标准工作溶液中内标物的浓度，ng/uL；

m'—样液中加入内标物的质量，ug；

m—样品量，g。

注：计算结果箱将空白值扣除。

相关链接：出口中药材中六六六、滴滴涕残留量检验方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷农药残留检测方法上》

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