1 范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定。

2 规范性引用文件

本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

3 原理

利用莱士曼氏乳酸杆菌（Lactobacillus leichmannii）对维生素B₁₂的特异性和灵敏性，定量测定出 试样中维生素B₁₂的含量。在测定用培养基中供给除维生素B₁₂以外的所有营养成分，这样微生物生长 产生的透光率就会同标准曲线工作液及未知待测溶液中维生素B₁₂的含量相对应。以不同浓度标准溶液 的透光率相对于各浓度水平标准物质的浓度绘制标准曲线，根据标准曲线即可计算出试样中维生素B₁₂ 的含量。

4 试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

4.1 菌株：莱士曼氏乳酸杆菌（Lactobacillus leichmannii） ATCC 7830。

4.2 维生素 B₁₂（Vitamin B₁₂ 或 Cyanocobalamin）标准品：分子式 C₆₃H₈₈CoN₁₄O₁₄P,纯度≥99%。

4.3 培养基

4.3.1 乳酸杆菌琼脂培养基。

4.3.2 乳酸杆菌肉汤培养基。

4.3.3 维生素B₁₂测定用培养基。

注：一些商品化合成培养基效果良好，商品化合成培养基按标签说明进行配制。

4.4 9g/L氯化钠溶液（生理盐水）

称取9.0g氯化钠溶解于1000mL水中，分装于具塞试管，每管10mL。121℃灭菌15min。

4.5 乙醇溶液：体积分数为25%。

4.6 无水磷酸氢二钠（Na₂HPO₄)。

4.7 无水偏重亚硫酸钠（Na₂S₂O₅）。

4.8 柠檬酸（含一个结晶水）（C₆H₈O₇·H₂O）。

4.9 标准溶液的制备

4.9.1 维生素B₁₂贮备液（l0ug/mL）：精确称取维生素B₁₂标准品（4.2）,用乙醇溶液（4.5）定容 至维生素B₁₂浓度为10ug/mL。

4.9.2 维生素B₁₂中间液（100ng/mL）:用乙醇溶液（4.5）将5.0mL维生素贮备液（4.9.1）定 容至500 mL。

4.9.3 维生素B₁₂工作液（1ng/mL）:用乙醇溶液（4.5）将5.0mL维生素中间液（4.9.2）定容 至 500 mL。

4.9.4 标准曲线工作液：分别吸取两个5mL维生素B₁₂工作液（4.9.3）于250mL和500mL容量瓶中， 用水定容至刻度。高浓度溶液的浓度为0.02ng/mL；低浓度溶液的浓度为0.01ng/mL。

注：所有标准溶液要储存于冰箱内。4.9.1、4.9.2和4.9.3保存期三个月，4.9.4临用前配制。

相关链接：婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定（二）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。