6 分析步骤

6.1 试样预处理

6.1.1 含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.0g （精确至0.0001g）,加入约25mL 45℃～50℃ 的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确至0.0001g）于150 mL锥形瓶中。加入约0.5 g淀粉酶（4.1）,混匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置50℃～60℃培养箱内约30min。取出冷却至室温。

6.1.2 不含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.0g（精确至0.0001g）,加入约25mL 45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确至0.0001g）于150 mL锥形瓶中。混匀并充分溶解， 静置5min～10min,冷却至室温。

6.2 待测液的制备

6.2.1 用盐酸溶液（4.6）调节试样溶液的pH值至1.7±0.1,放置约1min。再用氢氧化钠溶液（4.7）调节试样溶液的pH值至4.5±0.1。

6.2.2 将试样溶液转移至50mL容量瓶中，用水冲洗锥形瓶。洗液合并于50mL容量瓶中，用水定容 至 50 mL。

6.2.3 把上述容量瓶放入超声波振荡器中，超声振荡约10min。

6.2.4 另取50mL三角瓶，上面放入三角漏斗和滤纸，把超声波振荡的试样溶液倒入其中，自然过滤。 滤液再经0.45um微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为试样待测液。

6.3参考色谱条件

色谱柱：C₁₈柱（粒径5um, 150mm×4.6mm）或同等性能的色谱柱。

流动相：甲醇（4.4），50mL,辛烷磺酸钠（4.2） 2.0g,三乙胺（4.5）2.5mL,用水溶解并定容到 1000mL后，用冰乙酸（4.3）调pH至3.0±0.1,再经0.45um微孔滤膜加压过滤。

流速：1.0mL/min。

检测波长：激发波长293nm,发射波长395 nm。

进样量：10uL。

6.4 定量分析

6.4.1 标准曲线绘制

将维生素B₆混合标准系列测定液（4.8.3）依次进行色谱测定。记录各组分的色谱峰面积或峰高，以峰面积或峰高为纵坐标，以标准测定液的浓度为横坐标， 绘制标准曲线。

6.4.2 试样测定

将试样待测液（6.2.4）进行色谱测定。记录各组分色谱峰面积或峰高，根据标准曲线计算出试样待 测液中维生素B₆各组分的浓度C_i。

7 分析结果的表述

7.1 试样中维生素B₆各组分的含量的计算

试样中维生素B₆各组分的含量按式（1）计算：

式中：

X_i—试样中组分的含量，单位为微克每百克(ug/100g)；

C_i—试样待测液中维生素B₆各组分的浓度，单位为微克每毫升(ug/mL);

m—试样的质量，单位为克(g);

V—试样溶液的体积，单位为毫升(mL)。

7.2 试样中维生素B₆的含量的计算

试样中维生素B₆的含量按式(2)计算：

X=X_醇+X_醛X1.012+X_胺×1.006................... (2)

式中：

X—试样中维生素B₆含量，单位为微克每百克(ug/100g)；

X_醇—试样中吡哆醇含量，单位为微克每百克(ug/100g)；

X_醛—试样中吡哆醛含量，单位为微克每百克(ug/100g);

X_胺—试样中吡哆胺含量，单位为微克每百克(ug/100g);

1.012——吡哆醛的含量换算成吡哆醇的系数；

1.006—吡哆胺的含量换算成吡哆醇的系数。

注：试样中维生素B₆含量以吡哆醇计。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

8 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

9 其他

本标准检出限为：吡哆醇1.5ug/100g、吡哆醛1.3ug/100g, 吡哆胺1.6ng/100g。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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