11 仪器和设备

11.1 分光光度仪。

11.2 pH计：精度为0.01。

11.3 涡旋振荡器。

11.4 天平：感量为0.1 mg。

11.5 生化培养箱：36℃±1℃。

11.6 离心机：转速≥2000转/分钟。

11.7 滴定管：分刻度值为0.1mL。

12 分析步骤

12.1 测试菌液的制备

12.1.1 把植物乳杆菌(Lacrobaciillus plantarum)ATCC 8014冻干菌粉转入乳酸杆菌肉汤培养基(10.9.2) 试管中，36℃±1℃培养24h,转接至乳酸杆菌琼脂培养基(10.9.1)试管中，36℃±1℃再培养24h。 培养好的乳酸杆菌琼脂培养基(1091)试管的培养物作为贮备菌种。

12.1.2 从贮备菌种培养基上分别转接到三个乳酸杆菌琼脂培养基(10.9.1)试管中，放入培养箱中36℃±1摄氏度培养24h。每月转接一次，作为月接种管贮于冰箱中。每月定期从月接种管中重新接种3个转 接管保存新菌株。

12.1.3 从月接种的培养管中的一支再接种一支乳酸杆菌琼脂培养基(10.9.1)试管，36℃±1℃培养 24h,作为日接种管每日测定用。

12.1.4 从日接种管中接种一管乳酸杆菌肉汤培养基(10.9.2) , 36℃±1℃培养24h。在无菌条件下 离心该培养液10min (2000转/分钟)，弃去上清液。用10mL生理盐水(10.11)振荡洗涤菌体，离心 10 min (2000转/分钟)，弃去上清液，再加入10mL生理盐水(10.11)振荡清洗。如前离心操作，弃 去上清液。再加10 mL生理盐水(10.11),混匀。吸取适量该菌悬液于10 mL生理盐水(10.11)中， 混匀制成测试菌液。

12.1.5 以生理盐水(10.11)做对照，用分光光度计于550 nm波长下，测测试菌液(12.1.4)的透光 率，此值应在60%～80%。

12.2 试样的制备

称取2 g （精确至0.0001 g）固态试样或5 g （精确至0.0001 g）液态试样（约含烟酸0.1 mg）于250mL 三角烧瓶中，加20mL的硫酸溶液B （10.2）溶解试样，放入高压灭菌釜中121℃保持30 min,取 出冷却至室温。用氢氧化钠溶液A（10.3）和氢氧化钠溶液B （10.4）调pH至6.0～6.5,再用盐酸（10.6）, 调pH至4.5±0.1,用水定容至100 mL,过滤。吸取25 mL滤液于100 mL烧杯中，用氢氧化钠标准滴 定溶液（10.5）调pH至6.8±0.1,转入250 mL容量瓶中定容。

12.3 标准曲线管的制作

按表1顺序加入蒸馏水、标准溶液和培养基于试管中，表1中每一编号需制作3管。试管S2至S7中,相当烟酸含量为 0ng、100ng、200 ng、300 ng、400 ng、500 ng。

表1标准曲线管的制作

12.4 试样管的制作

按表2顺序加入蒸馏水、试样和培养基于试管中，表中每一编号需制作3管。

表2试样管的制作

相关链接：乳品中烟酸和烟酰胺的测定—微生物法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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