4.14 标准溶液的制备

4.14.1 叶酸标准贮备液(500ug/mL):称取55mg～56mg(精确至0.1mg)叶酸标准品(4.4),用50mL蒸镏水转入100mL容量瓶中，加2mL氨水(4.5)。溶液制备后，按式(1)计算溶液的体积，要求贮备液中叶酸盐的浓度为500ug/mL：

式中：

m—叶酸标准品的质量，单位为毫克(mg)；

c—叶酸标准品的纯度，单位为克每百克(g/100g)。

用水稀释溶液至刻度，用吸管加水至计算要求的体积，充分混合，放入棕色试剂瓶中2℃～4℃冰箱冷藏，保存期为4个月。

4.14.2 叶酸标准中间液(50ug/mL):吸取10mL叶酸标准贮备液(4.14.1)于100mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，充分混匀，2℃～4℃冰箱冷藏，保存期为1个月。

4.14.3 叶酸标准工作液(0.05ng/mL,0.1ng/mL):吸取1mL叶酸标准中间液(4.14.2)于100mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，混合。再吸该液ImL于100mL棕色容量瓶中，定容，混合。从上液中分别吸取5mL于250mL和500mL棕色容量瓶中，用磷酸盐缓冲液I(4.3.1)定容到刻度，混匀，即为高浓度标准工作液(0.1ng/mL)和低浓度标准工作液(0.05ng/mL)。临用前配制。

4.15 盐酸(1mol/L):量取83.0mL盐酸溶于水中，冷却后定容至1000mL。

4.16 氢氧化钠溶液A(4mol/L):称取160g氢氧化钠于1000mL烧杯中，用400mL水溶解，冷却至室温后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容。

4.17 氢氧化钠溶液B(0.1mol/L):吸取2.5 mL氢氧化钠溶液A(4.16)转移至100mL容量瓶中用 水定容。

4.18 氢氧化钠标准滴定溶液(0.1mol/L±0.0002 mol/L)：称取4 g (精确至0.0001g)氢氧化钠用水稀释至1000mL,用邻苯二甲酸氢钾标定。保存此溶液的容器要密封，以防二氧化碳渗入。

4.18.1氢氧化钠标准溶液的标定：称取约0.18g(精确至0.0001g)于105℃～110℃烘至恒重的邻 苯二甲酸氢钾，用50 mL除二氧化碳的水溶于锥形瓶中，加两滴5 g/L的酚酞指示剂，用配好的氢氧化 钠溶液滴定至粉红色，同时作空白实验。按式(2)计算氢氧化钠标准溶液的浓度：

式中：

c—氢氧化钠的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；

m一称取的邻苯二甲酸氢钾的质量，单位为克(g)；

V₁—氢氧化钠溶液的用量，单位为毫升(mL)；

V₂—空白试验氢氧化钠溶液的用量，单位为毫升(mL)。

4.18.2 酚酞溶液：取0.5g酚酞溶于75 mL体积分数为95%的乙醇中，加入20mL水，再加入氢氧 化钠溶液(4.18),直至加入一滴立即变成粉红色，再用水定容至100 mL。

4.19 溴麝香草酚蓝指示剂：称取0.1麝香草酚蓝于研钵中，加入1.6mL氢氧化钠溶液B(4.17)研磨，加少许水至完全溶解，转移至250 mL容量瓶中用水定容。

5 仪器和设备

5.1 pH计：精度为0.01。

5.2 离心机：转速≥2000转/分钟。

5.3 分光光度仪。

5.4 天平：感量为0.1mg。

5.5 生化培养箱：36℃±1℃

5.6 滴定管：分刻度值为0.lmL。

5.7 涡旋振荡器。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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