1 范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定。

2 规范性引用文件

本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。

3 原理

利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对游离生物素的特异性和灵敏性，定量测定出试样中待 测物质的含量。在含有除待测物质以外所有营养成分的培养基中，微生物的生长与待测物质含量呈线性 关系，根据透光率与标准工作曲线进行比较，即可计算出试样中待测物质的含量。

4 试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

4.1 菌株：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) , ATCC 8014。

4.2 生物素(d-Biotin或Vitamin H)标准品(C₁₀H₁₆N₂O₃S):纯度≥99%。

4.3 培养基

4.3.1 乳酸杆菌琼脂培养基。

4.3.2 乳酸杆菌肉汤培养基。

4.3.3 生物素测定用培养基。

注：一些商品化合成培养基效果良好，商品化合成培养基按标签说明进行配制。

4.4 乙醇溶液(50%)。

4.5 硫酸溶液(3%):量取3mL硫酸加入到水中，定容至100mL。

4.6 氢氧化钠溶液(0.5 mol/L):称取20 g氢氧化钠溶于1000 mL水中。

4.7 氯化钠溶液(9g/L):称取9.0 g氯化钠溶解于1000 mL水中，分装试管，每管10mL。121℃灭 菌 15 min。

4.8 标准溶液的制备

4.8.1 生物素标准贮备液(100ng/mL):称取生物素标准品(4.2)用乙醇溶液(4.4)定容至生物素 浓度为100 ug/mL,贮于冰箱中。

4.8.2 生物素标准中间液(lug/mL):吸取1 mL生物素标准贮备液(4.8.1),用乙醇溶液(4.4)定 容至100 mL。

4.8.3 生物素标准工作液(10ng/mL)：吸取1 mL生物素标准中间液(4.8.2),用乙醇溶液(4.4) 定容至100 mL。

4.8.4 标准曲线工作液

分两个浓度，高浓度溶液的浓度为0.2ng/mL；低浓度溶液的浓度为0.1ng/mL。从工作液中(4.8.3) 吸取两次各5mL,用水分别定容到250mL和500mL。

注：所有标准溶液要储存于冰箱内。4.8.1、4.8.2和4.8.3保存期三个月，4.8.4临用前配制。

5 仪器和设备

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

5.1 天平：感量为0.1mg。

5.2 pH 计：精度≤0.02。

5.3 分光光度计。

5.4 涡旋混合器。

5.5 离心机：转速≥2000转/分钟。

5.6 恒温培养箱：36℃±1℃。

5.7 冰箱：2℃～5℃。

5.8 无菌吸管：10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器或吸头。

5.9 瓶口分液器：0mL～10mL。

5.10 锥形瓶：200 mL。

5.11 容量瓶(A类)：100mL, 250mL, 500mL。

5.12 单刻度移液管(A类)：容量5mL。

5.13 漏斗：直径90 mm。

5.14 定量滤纸：直径90 mm。

5.15 试管：18mm×l80mm。

注：玻璃仪器使用前，用活性剂(月桂磺酸钠或家用洗涤剂加入到洗涤用水中即可)对硬玻璃测定管及其他必要的 玻璃器皿进行清洗，清洗之后在200℃干热2h。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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