5.2测定

5.2.1标准曲线的制作

分别吸取2mL、4mL、6mL、8mL胆碱氢氧化物标准工作溶液于10mL的容量瓶中，用蒸镏水稀释至刻度。准备6支试管，一个试管用作试剂空白（A）,另五支试管由1至5编号，分别用于标准溶液 和标准溶液的四个稀释度。按表1加入试剂。

表1 制作标准曲线时的试剂添加量     单位：毫升

用密封保护膜盖住试管，混匀，把试管置于37℃水浴中保温反应15 min。

5.2.2 试样的测定

将每个试样准备2支试管（B,C）,按表2加入试剂。

表2测定试样时的试剂添加量     单位：毫升

用密封保护膜盖住试管，混匀。把试管置于37℃水浴中保温反应15min。

5.2.3 比色测定

将试样及标准系列溶液从水浴中取出，冷却至室温。在波长505nm处，用蒸镏水作空白，测定 吸光值。以胆碱标准溶液的浓度为横坐标，以标准溶液的吸光值减去试剂空白的吸光值为纵坐标，制 作标准曲线。

6 分析结果的表述

6.1 净吸光值的计算

通常新鲜配制的试剂会产生轻微颜色,且由于水解作用滤液也不是无色的，为了除去这些干扰因素, 应该从总吸光值中减去各自的空白值（管A和管B）。

试样净吸光值计算如公式（1）所示：

A=A_tot-A_bl-A_ex-------------------(1)

式中：

A—试样净吸光值；

A_tot—总吸光值（管C）；

A_bl—试剂吸光值（管A）；

A_ex—滤液吸光值（管B）。

A_bl和A_ex不应大于总吸光值的20%,对于标准曲线，A_ex=0。

6.2 胆碱含量的计算

在标准曲线上查出净吸光值的位置，并记下相应的浓度c,以每100g试样中胆碱氢氧化物的毫克 数表示胆碱的含量（X），单位为（mg/100g）,试样中的胆碱氢氧化物含量按公式（2）计算：

式中：

X—试样中的胆碱氢氧化物含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；

c—自标准曲线上查得的胆碱氢氧化物的浓度，微克每毫升（ug/mL）；

V—水解液被稀释的体积（通常为50mL）,单位为毫升（mL）；

m—试样的质量，单位为克（g）;

1000——换算系数。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留整数位。

7 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的8%。

8 其他

方法检出限为1mg/100g,定量限为3mg/100g。

相关链接：婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定—酶比色法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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