1 范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。

2 原理

试样中的胆碱经酸水解后变成游离态的胆碱，再经酶氧化后与显色剂反应生成有色物质，其颜色的深浅在一定浓度范围内与胆碱含量成正比。

3 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。

3.1 试剂

3.1.1 三羟甲基氨基甲烷［(CH₂OH)₃CNH₂]。

3.1.2 苯酚(C₆H₅OH)。

3.1.3 浓盐酸(HC1)。

3.1.4 氢氧化钠(NaOH)。

3.1.5 胆碱氧化酶：置于-20℃保存。

3.1.6 过氧化物酶：置于2℃～8℃保存。

3.1.7 4-氨基安替比林(C₁₁H₁₃N₃O)。

3.1.8 磷脂酶D：置于-20℃保存。

3.2 试剂配制

3.2.1 盐酸(1mol/L):量取85mL浓盐酸加水稀释至1000mL。

3.2.2 盐酸(3mol/L)：量取125mL浓盐酸加水稀释至500mL。

3.2.3 Tris缓冲溶液(0.05mol/L):pH=8.0±0.2。

称取6.057g三羟甲基氨基甲烷溶入500mL蒸镏水中，用1mol/L盐酸调pH至8.0±0.2,用蒸馆水定 容至1000mL。此溶液在4℃冰箱中可保存一个月。

3.2.4 用于酶反应的显色剂：取100～120活力单位的胆碱氧化酶、250～280活力单位的过氧化物酶、 75个～100个活力单位的磷脂酶D、15mg 4-氨基安替比林,50mg苯酚置于100mL的容量瓶中，用0.05mol/LTris缓冲溶液稀释至刻度。临用时配制。

3.2.5 氢氧化钠溶液(500g/L)：称取500g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000mL。

3.3标准品

胆碱酒石酸氢盐标准品（C₉H₁₉NO₇）:纯度≥99%。

3.4标准溶液配制

3.4.1 胆碱氢氧化物标准贮备溶液（2.5 mg/mL）:称取在102℃±2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐523 mg置于100mL容量瓶中，用蒸镏水稀释至刻度。冷藏于4℃±2℃冰箱中，保存不超过1周。

3.4.2 胆碱氢氧化物标准工作溶液（250ug/mL）:吸取10.0mL标准贮备溶液于100mL容量瓶中， 用水稀释至刻度。临用时配制。

4 仪器和设备

4.1 天平：感量为0.01g和0.1mg。

4.2 恒温水浴锅：温度可控制在70℃±2℃和379±2℃。

4.3 pH计：精度0.01。

4.4 分光光度计。

5 分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 固体试样

称取5g（精确到0.01g）混合均匀的试样，于100mL的锥形瓶中，加入30mL盐酸溶液（321）。

5.1.2液体试样

称取20g（精确到0.01g）混合均匀的试样，于100mL的锥形瓶中，加入10mL盐酸溶液（3.2.2）。

5.1.3水解

将装有试样的容器放在70℃水浴中，加塞混匀，水解3h（每隔30min振摇一次），冷却。用氢氧化钠溶液调pH为3.5～4.0,转入50mL容量瓶中，用蒸镏水定容至刻度。

5.1.4过滤

过滤水解液（5.1.3）。滤液应是澄清的，否则，用0.45um的滤膜再次过滤。滤液放在4℃的冰箱 中可以保存3d。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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