7 测定步骤

7.1 提取

称取试料(5±0.05)g,于离心管中，加乙腈10mL,旋涡混合1min,超声2min,5000r/min离心5min,取上清液，残渣中加乙腈10mL重复提取一次，合并两次上清液。于40℃水浴旋转蒸干。

用2%甲酸水溶液5mL溶解残余物，加正己烷4mL,混匀，5000r/min离心5min,弃正己烷层液，备用。

7.2 净化

MCX柱依次用甲醇3mL、水3mL和2%甲酸水溶液3mL活化，取备用液过柱，控制流速小于1mL/min,用2%甲酸水3mL和甲醇3mL淋洗，抽干，用5%氨化甲醇4mL洗脱。收集洗脱液，于40℃氮气吹干，用流动相1.0mL溶解残余物，旋涡混匀，供高效液相色谱法测定。

7.3 标准曲线的制备

精密量取1ug/mL混合标准工作液适量，用甲醇稀释，配制成浓度为10、20、50、100、200、500和1000ug/L的系列混合标准溶液。每个浓度重复3次，供高效液相色谱测定，以测得峰面积平均值为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.4 测定

7.4.1 色谱条件色谱柱：C₁₈(250mm×4.6mm,粒径5um),或相当者；

流动相：乙腈+5mmol/L乙酸铵溶液(50+50,v/v)；

流速：1mL/min；

紫外检测波长：250nm；

柱温：40℃；

进样量：50uL。

7.4.2 测定法

取试样溶液和相应的标准溶液，做单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中氮哌酮和氮哌醇响应值应在仪器检测的线性范围之内。

7.5 空白试验

除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。

8 结果计算与表述

试料中氮哌酮和氮哌醇残留量(ug/kg)：按下式计算

或标准曲线校准：由4s=aCs+b,

式中：

X—供试试料中相应的氮哌酮及代谢物残留量，ug/kg；

A—试样中相应的氮哌酮及代谢物峰的面积；

As—标准工作液中相应的氮哌酮及代谢物峰的面积；

Cs—标准工作液中相应的氮哌酮及代谢物的浓度，ug/L;

C—供试试料溶液中相应的氮哌酮及代谢物的浓度，ug/L；

V—片溶解残余物所用流动相体积，mL;

m—供试试料质量，g。

注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字.

9 检测方法灵敏度、准确度、精密度

9.1 灵敏度

本方法的检测限为2ug/kg,定量限为5ug/kg。

9.2 准确度

本方法在肌肉、皮+脂组织5～60ug/kg、在肝脏和肾脏组织5～100ug/kg添加浓度水平上的回收率为60%～110%。

9.3 精密度

本方法批内相对标准偏差≤20%,批间相对标准偏差≤20%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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