6 培养基和试剂性能测试方法

6.1 生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制的测试方法

6.1.1 非选择性分离和计数固体培养基的目标菌生长率定量测试方法

6.1.1.1 平板的制备与保存

倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个至少3mm厚的琼脂层(直径90mm的平皿通常要加入18mL～20mL琼脂培养基),需添加试剂的培养基，应使培养基冷却至47℃~50℃后才添加试剂。倾注后将平板放到水平平面,使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和(或)2℃～8℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应对琼脂表面进行干燥，但应注意不要过度干燥。

6.1.1.2 工作菌悬液的制备

将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他方法，制备10倍系列稀释的菌悬液。生长率测试常用每平板的接种水平为20CFU～200CFU。

6.1.1.3 接种

选择合适稀释度的工作菌悬液0.1mL,均匀涂布接种于待测平板和参比平板。每一稀释度接种两个平板。可使用螺旋平板法或倾注法进行接种，并按标准规定的培养条件培养平板。

6.1.1.4 计算

选择菌落数适中的平板进行计数，按下列式(1)计算生长率。

式中：

P_R—生长率；

Ns—待测培养基平板上得到的菌落总数；

No—参比培养基平板上获得的菌落总数(该菌落总数应＞100CFU)。

参比培养基的选择：一般细菌采用TSA,一般霉菌和酵母采用沙氏葡萄糖琼脂，对营养有特殊要求的微生物采用适合其生长的不含抑菌剂或抗生素的培养基。

6.1.1.5 结果解释

目标菌在培养基上应呈现典型的生长。非选择性分离和计数固体培养基上目标菌的生长率应不小于0.7。

6.1.2 选择性分离和计数固体培养基的测试方法

6.1.2.1 目标菌生长率定量测试方法

6.1.2.1.1 平板的制备与保存

按照6.1.1.1中要求进行。

6.1.2.1.2 工作菌悬液的制备

按照6.1.1.2中要求进行。

6.1.2.1.3 接种

按照6.1.1.3中要求进行。

6.1.2.1.4 计算

按照6.1.1.4中要求进行。

6.1.2.1.5 结果解释

目标菌在培养基上应呈现典型的生长。选择性分离固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.5,最低应为0.1；选择性计数固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.7。

6.1.2.2 非目标菌(选择性)半定量测试方法

6.1.2.2.1 平板的制备与保存

按照6.1.1.1中要求进行。

6.1.2.2.2 工作菌悬液的制备

将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。

6.1.2.2.3 接种

用1uL接种环取选择性测试工作菌悬液1环，在待测培养基表面划六条平行直线(如图1),同时接种两个平板，划线时可在培养基下面放一个模板图，按标准规定的培养条件培养平板。

操作时用接种环而不用接种针，接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次可去除多余的液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度应为20°～30°。接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。

图1非目标菌半定量划线法接种模式图

6.1.2.2.4 计算

培养后按以下方法对培养基计算生长指数G。每条有比较稠密菌落生长的划线则G为1,每个培养皿上最多为6分。如果仅一半的线有稠密菌落生长，则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，则G为0。记录每个平板的得分总和便得到G。同时接种两个平板。

6.1.2.2.5 结果解释

非目标菌的生长指数G—般小于或等于1,至少应达到小于5。

6.1.2.3 非目标菌(特异性)定性测试方法

6.1.2.3.1 平板的制备与保存

按照6.1.1.1中要求进行。

6.1.2.3.2 工作菌悬液的制备

按照6.1.1.2中要求进行。

6.1.2.3.3 接种

用1uL接种环取测试菌培养物在测试培养基表面划平行直线。并按标准规定的培养条件培养平板。

6.1.2.3.4 结果解释

非目标菌应有典型的菌落外观、大小和形态。

相关链接：食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求（六）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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