6.1.5 突变频率(MF)

突变频率的计算见式(5)：

式中：

EW—无集落生长的孔数；

TW—总孔数；

N—每孔接种细胞数(L5178Y细胞为2000,TK6细胞为30000)；

PE273—第2天(L5178Y细胞)或第3天(TK6细胞)的平板效率。

此外,对于L5178Y细胞，可分别计算大集落突变频率(L-MF)、小集落突变频率(S-MF)和总突变频率(T-MF)。对于TK6细胞，可分别计算正常集落突变频率(N-MF)、缓慢生长集落突变频率(S-MF)和总突变频率(T-MF)。

6.1.6 小集落突变百分率(Small colony mutation,SCM)或缓慢生长集落突变百分率(slowly-growth colony mutation,SCM)

小集落突变百分率或缓慢生长集落突变百分率的计算见式(6):

6.2 结果评价

6.2.1 试验成立的条件

试验所用L5178Y细胞的自发突变频率应在50×10^-6～200×10^-6之间；TK6细胞的自发突变频率应在1.5×10^-6～5.5×10^-6之间，同时自发突变频率应在本实验室历史记录范围内。阴性/溶媒对照的PE。在60%～140%之间,PE₂/PE₃的值在70%～130%之间。阳性对照的T-MF与阴性/溶媒对照有显著差异，或是阴性/溶媒对照3倍以上。

6.2.2 受试物阳性和阴性结果的判定

6.2.2.1 阳性结果的判定。受试物一个以上剂量(浓度)组的T-MF显著高于阴性/溶媒对照，或是阴性/溶媒对照的3倍以上,并有剂量-反应趋势,则可判定为阳性。但如仅在相对存活率低于20%的高剂量情况下出现阳性,则结果判为“可疑”。

6.2.2.2 阴性结果的判定。在相对存活率低于20%的情况下未见突变频率的增加，可判定为阴性。

7 试验报告

7.1 试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号。

7.2 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期。

7.3 试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期。

7.4 试验摘要。

7.5 受试物:名称、鉴定资料、CAS编号(如已知)、纯度、与本试验有关的受试物的物理和化学性质及稳定性等。

7.6 溶媒和载体:溶媒或载体的选择依据,受试物在溶媒和载体中的溶解性和稳定性。

7.7 细胞系：名称、来源及其特性。

7.8 试验条件:溶媒、剂量、代谢活化系统、阳性对照物、操作步骤等。

7.9 试验结果:每个剂量(浓度)表达培养期间细胞的密度、0d的平板接种效率、第2天或第3天的平板接种效率、相对存活率、相对悬浮生长和相对总生长、总突变频率［必要时给出大集落突变频率、小集落突变频率和小集落突变突变百分率(L5178Y细胞)、或正常集落突变频率、缓慢生长集落突变频率和缓慢生长集落突变百分率(TK6细胞)］、统计结果、是否具有剂量-反应趋势、同时进行的溶媒对照和阳性对照的结果及其本实验室溶媒对照和阳性对照结果的历史范围。

7.10 试验结论。

8 试验的解释

TK基因突变试验具有较高的敏感性,可检出包括点突变、大的缺失、重组、异倍体和其他较大范围基因组改变在内的多种遗传改变,长时间处理还可检出某些断裂剂、纺锤体毒物和多倍体诱导剂等。但体外试验不能完全模拟哺乳动物体内代谢条件，因此,本试验结果不能直接外推到哺乳动物。阳性结果表明受试样品在该试验条件下可引起所用哺乳类细胞基因突变；阴性结果表明在该试验条件下受试样品不引起所用哺乳类细胞基因突变。评价时应综合考虑生物学意义和统计学意义。

相关链接：体外哺乳类细胞TK基因突变试验（三）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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