8 未反应中间体总和的测定

8.1 方法提要

采用反相液相色谱法，用外标法分别定量各未反应中间体，最后计算未反应中间体总和的质量分数。

8.2 试剂和材料

8.2.1 甲醇；

8.2.2 乙酸铵溶液：2g/L;

8.2.3 1-萘胺4-磺酸钠；

8.2.4 7-羟基-1,3-茶二磺酸钠；

8.2.5 3-羟基-2,7-萘二磺酸钠；

8.2.6 6-羟基-2-萘磺酸钠；

8.2.7 7-羟基-1,3,6-萘三磺酸钠。

8.3 仪器和设备

8.3.1 液相色谱仪：输液泵一流量范围0.1mL/min～5.0mL/min,在此范围内其流量稳定性为±1%；检测器-多波长紫外分光检测器或具有同等性能的紫外分光检测器；

8.3.2 色谱柱：长为150mm,内径为4.6mm的不锈钢柱，固定相为C₁₈,粒径5um;

8.3.3 色谱工作站或积分仪；

8.3.4 超声波发生器；

8.3.5 定量环：20uL。

8.4 色谱分析条件

8.4.1 检测波长：238nm；

8.4.2 柱温：30℃；

8.4.3 流动相：A，乙酸铵溶液；B，甲醇；

浓度梯度：A(100)比B(0)保持5min,再50min线性浓度梯度从A(100)比B(0)至A(70)比B(30)；

8.4.4 流量：1.0mL/min；

8.4.5 进样量：20μL。

可根据仪器不同，选择最佳分析条件，流动相应摇匀后用超声波发生器进行脱气。

8.5 试样溶液的配制

称取约0.1g苋菜红试样(精确至0.0001g),加乙酸铵溶液溶解并定容至100mL。

8.6 标准溶液的配制

分别称取约0.01g(精确至0.0001g)已于真空干燥器中干燥24h后的1-萘胺-4-磺酸钠、7-羟基-1,3-萘二磺酸钠、3-羟基-2,7-萘二磺酸钠、6-羟基-2-萘磺酸钠、7-羟基-1,3,6-萘三磺酸钠。用乙酸铵溶液分别溶解并定容至100mL。然后分别吸取10.0mL、5.0mL、2.0mL、1.0mL上述各标准溶液,用乙酸铵溶液定容至100mL。配制成系列标准溶液。

8.7 分析步骤

在本标准8.4规定的色谱分析条件下，分别用微量注射器吸取试样溶液及系列标准溶液注入并充满定量环进行色谱检测，待最后一个组分流出完毕，进行结果处理。测定各标准溶液物质的峰面积，分别绘制成各标准曲线。测定试样溶液中的1-萘胺4磺酸钠、7-羟基-1,3-萘二磺酸钠、3-羟基-2,7-萘二磺酸钠、6-羟基-2-萘磺酸钠、7-羟基-1,3,6-萘三磺酸钠的峰面积，根据各标准曲线求出各自未反应中间体的质量分数。

8.8 结果计算

未反应中间体的总和以质量分数W₁₃计，数值用％表示，按公式(9)计算：

w₁₃=w₈+w₉+w₁₀+w₁₁+w₁₂-------(9)

式中：

W8—1-萘胺4-磺酸钠的含量％；

W9—7-羟基-1,3-荼二磺酸钠的含量％；

W10―3-羟基-2,7-茶二磺酸钠的含量％；

W11—6-羟基-2-萘磺酸钠的含量％；

W12—7-羟基-1,3,6-萘三磺酸钠的含量％。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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