A.1 一般规定

本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682—2008中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

A.2 鉴别试验

A.2.1 不溶于水，极微溶于正己烷，溶于乙醇和氯仿。

A.2.2 在测定总类胡萝卜素含量试验中，试样液在446nm附近有最大吸收。

A.2.3 在测定叶黄素含量试验中，试样液在液相色谱图中的主峰保留时间应与标准溶液中叶黄素的保留时间相同。

A.3 总类胡萝卜素的测定

A.3.1 试剂和材料

A.3.1.1 溶剂：正己烷、丙酮、甲苯和无水乙醇的混合物(10：7：7：6)。

A.3.1.2 无水乙醇。

A.3.2 仪器和设备

紫外-可见分光光度计。

A.3.3 分析步骤

准确称取0.03g试样,精确至0.0001g,用A.3.1.1溶剂溶解,转移至100mL容量瓶中，加A.3.1.1溶剂定容至刻度，摇匀.取此试样液1mL于100mL容量瓶中，使用无水乙醇定容至刻度，置于1cm比色皿中，以无水乙醇做空白对照，用紫外-可见分光光度计在446nm±1nm处的最大吸收波长处测定吸光度。(吸光度应控制在0.3～0.7之间，否则应调整试样液浓度，再重新测定吸光度。)

A.3.4 结果计算

总类胡萝卜素含量以总类胡萝卜素的质量分数w0计，数值以％表示，按公式(A.1)计算：

式中：

A—实际测定试样液的吸光度；

C—被测试样液的浓度的数值，单位为克每毫升(g/mL);

2550—1%试样液在无水乙醇中波长446nm处的吸收系数。

实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.5%,计算结果保留小数点后一位有效数字。

A.4 叶黄素和玉米黄质的测定

A.4.1 试剂和材料

A.4.1.1 正己烷：色谱纯。

A.4.1.2 乙酸乙酯：色谱纯。

A.4.1.3 叶黄素标准品：已知纯度。

A.4.1.4 玉米黄质标准品：已知纯度。

A.4.2 仪器和设备

高效液相色谱仪(检测器波长为446nm)。

A.4.3 参考色谱条件

A.4.3.1 色谱柱：硅胶柱，4.6mm×250mm,粒度3um;或其他等效的色谱柱。

A.4.3.2 流动相：按正己烷：乙酸乙酯=70:30(体积比)配制，混合均匀后，用0.45um滤膜过滤,超声脱气后备用。

A.4.3.3 柱温：室温。

A.4.3.4 流动相流速：1.5mL/min。

A.4.3.5 进样量：10uL。

A.4.4 分析步骤

A.4.4.1 标准溶液的制备

分别称取约0.01g叶黄素和玉米黄质标准品，精确至0.0001g,用流动相溶解，移入一个50mL容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀备用。

A.4.4.2 试样液的制备

称取0.025g～0.027g试样，精确至0.0001g,用流动相溶解，移入一个100mL容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀备用。

A.4.4.3 测定

在A.4.3参考色谱条件下，对叶黄素和玉米黄质的标准溶液进行测定，记录色谱图。要求以叶黄素峰计，理论板数至少为5000,主峰与异构体峰的分离度至少为1.5。

在A.4.3参考色谱条件下，对试样液进行测定，根据标准品的保留时间定性，记录色谱图。重复实验两次，分别得到叶黄素和玉米黄质的平均峰面积值。

A.4.5 结果计算

叶黄素含量以叶黄素的质量分数w1计，数值以％表示，按公式(A.2)计算：

w1=w0×P1..............(A.2)

玉米黄质含量以玉米黄质的质量分数w2计，数值以％表示，按公式(A3)计算：

w2=w0×P2........(A3)

式中：

w0—按照本标准A3测定的总类胡萝卜素的质量分数，数值以％表示：

P1—叶黄素的峰面积百分比；

P2—玉米黄质的峰面积百分比。

实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的2%,计算结果保留小数点后一位有效数字。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(二)》

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