A.1 一般规定

本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682-2008中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均水溶液。

A.2 鉴别试验

A.2.1 溶解性

易溶于乙酸乙酯和正己烷，部分溶于乙醇和丙酮，不溶于水。

A.2.2 颜色反应

称取约0.01g试样，溶于10mL丙酮中，形成橙红色透明溶液，向其中连续滴加等体积的5%硝酸钠溶液(5g溶于100mL水中)和1mol/L硫酸溶液，试样溶液的颜色变浅。

A.2.3 特征吸收峰

取适量试样，溶于正已烷中，此试样溶液在446nm、472nm、505nm附近波长处有特征吸收峰。

A.3 番茄红素含量的测定

A.3.1 试剂和材料

A.3.1.1 二氯甲烷：色谱纯。

A.3.1.3 乙酸乙酯：色谱纯。

A.3.1.4 水：一级水。

A.3.1.5 乙醇。

A.3.1.6 石油醚：沸程60℃～90℃

A.3.1.7 2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)。

A.3.1.8 番茄红素对照品：纯度≥90%。

A.3.2 仪器和设备

A.3.2.1 高效液相色谱仪。

A.3.2.2 紫外-可见分光光度计。

A.3.3 参考色谱条件

A.3.3.1 色谱柱：固定相为C18,250mm×4.6mm,5um;或其他等效的色谱柱。

A.3.3.2 柱温：25℃。

A.3.3.3 检测器：紫外/可见光检测器或二极管阵列检测器

A.3.3.4 检测波长：472nm。

A.3.3.5 流动相：流动相A为乙腈溶液(9+1),流动相B为乙酸乙酯。洗脱条件为二元线型梯度：流动相B在20min内由0%上升到100%,20min后流动相B保持100%运行5min。

A.3.3.6 流速：1.0mL/min。

A.3.3.7 进样量：10uL。

A.3.4 分析步骤

A.3.4.1 BHT溶液的配制

准确称量2.5g BHT置于500mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容，浓度为5000mg/L,密闭避光放置，可稳定储存3个月。

A.3.4.2 番茄红素对照品溶液的配制

分别称取10mg番茄红素对照品和20mg BHT,精确至0.0001g,取少量二氯甲烷溶解后，转移至100mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容，混合均匀。由于番茄红素不稳定，番茄红素对照品溶液使用前应采用A.3.4.3方法标定其纯度。番茄红素对照品溶液应在-20℃条件下储存，24h内可使用。

A.3.4.3 番茄红素对照品溶液的标定

量取1mL(VA)番茄红素对照品溶液，置于50mL(VB)棕色容量瓶中，加入5mL乙醇和5mL BHT溶液，用石油醚定容，混匀。将此溶液置于1cm比色皿中，以石油醚作空白对照，用紫外-可见光分光光度计在472nm附近的最大吸收波长处测定吸光度。吸光度应控制在0.3～0.7之间，否则应调整溶液浓度,再重新测定吸光度。番茄红素对照品溶液中番茄红素浓度以csT计，单位为毫克每升(mg/L),按公式(A.1)计算：

式中

Amax—番茄红素对照品溶液在472nm附近的最大吸收波长处测得的吸光度值；

D—稀释因子(VB/VA);

10000—浓度换算因子；

3450—番茄红素的吸光系数。

A.3.4.4 标准曲线的制备

分别吸取适量番茄红素对照品溶液，用二氯甲烷稀释，并用棕色容量瓶定容，配制成浓度分别为1.0ug/mL、5.0ug/mL、10.0ug/mL、20.0ug/mL、30.0ug/mL、40.0ug/mL、50.0ug/mL系列的番茄红素标准溶液。在A.3.3参考色谱条件下，对系列的番茄红素标准溶液进行色谱分析，得到峰面积值-番茄红素浓度的标准曲线图。

A.3.4.5 试样液的配制

取适量试样置于玻璃容器中，于60℃水浴中30min融化。称取融化后的试样1.0g～1.2g,精确至0.0001g,用少量二氯甲烷溶解后转移至100mL棕色容量瓶中，加入10mL BHT溶液，超声混匀，冷却至室温，用二氯甲烷定容。再取1mL置于50mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容，混匀后用于高效液相色谱分析。

A.3.4.6 测定

在A.3.3参考色谱条件下，对试样液进行色谱分析，以保留时间和光谱特征定性，以试样中番茄红素组分峰面积与标准曲线比较定量。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(二)》

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