A.4.3.2 液相色谱法

A.4.3.2.1 方法提要

棕榈酸视黄酯(棕榈酸维生素A)在四丁基氢氧化铵的作用下，水解为维生素A醇，注入反相色谱柱上，用流动相洗脱分离，紫外检测器测定，外标法计算棕榈酸视黄酯(棕榈酸维生素A)含量。

A.4.3.2.2 参考色谱条件

A.4.3.2.2.1 色谱柱：C18液相色谱柱，125mm×4mm，粒径5um，或同等性能的色谱柱。

A.4.3.2.2.2 流动相：甲醇：水=95：5(体积比)。

A.4.3.2.2.3 流速：1mL/min。

A.4.3.2.2.4 检测波长：325nm。

A.4.3.2.2.5 进样量：10uL。

A.4.3.2.2.6 保留时间：维生素A醇的保留时间约为3min。

A.4.3.2.3 试样溶液的制备

称取约0.1g试样，精确至0.0001g，置于100mL容量瓶中，用5mL戊烷迅速溶解。加入40mL四丁基氢氧化铵溶液。轻轻振摇，让混合液在60～65℃下水解反应10min(可采用水浴超声处理)。冷却至室温，用异丙醇溶液稀释至100mL，轻摇混匀防止产生气泡，得到试样储备液。移取适量试样储备液，用异丙醇稀释配制成每毫升约含100IU棕榈酸视黄酯(棕榈酸维生素A)的试样溶液。

A.4.3.2.4 标准溶液的制备

称取适量全反式醋酸维生素A标准品(称样量约含1×10⁵IU全反式醋酸维生素A)，精确至0.0001g，置于100mL容量瓶中，用5mL戊烷迅速溶解。加入40mL四丁基氢氧化铵溶液。轻摇混匀，让混合液在60～65℃下水解反应10min(可采用水浴超声处理)。冷却至室温，用异丙醇溶液稀释至100mL，轻摇混匀防止产生气泡，得到标准储备液。

移取5.0mL标准储备液，置于50mL容量瓶中，用异丙醇稀释定容至刻度，得到标准溶液。

A.4.3.2.5 测定

在A.4.3.2.2参考色谱条件下，分别对试样溶液和标准溶液进行测定，重复进样两次，分别记录相应色谱图中维生素A醇的峰面积值。按A.4.4结果计算中的公式(A.2)计算试样中棕榈酸视黄酯(棕榈酸维生素A)的含量。

A.4.4 结果计算

A.4.4.1 紫外分光光度法

棕榈酸视黄酯(棕榈酸维生素A)或醋酸维生素A含量w1以国际单位每克(IU/g)计，按公式(A.1)计算：

式中：

A₃₂₆——试样溶液在326nm处的吸光度；

1900——棕榈酸视黄酯(棕榈酸维生素A)或醋酸维生素A的吸光度与含量之间的换算系数；

V——试样溶液的稀释体积，单位为毫升(mL)；

m——试样的质量，单位为克(g)；

100——换算系数。

实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的2%。

A.4.4.2 液相色谱法

棕榈酸视黄酯(棕榈酸维生素A)含量w2以国际单位每克(IU/g)计，按公式(A.2)计算

式中：

A1——试样溶液色谱图中维生素A醇的平均峰面积值；

c——用A.4.3.1紫外分光光度法测得的全反式醋酸维生素A标准品的含量，单位为国际单位每克(IU/g)；

m2——全反式醋酸维生素A标准品的称样量，单位为毫克(mg)；

A2——标准溶液色谱图中维生素A醇的平均峰面积值；

m1——试样的质量，单位为毫克(mg)。

实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。

A.5 酸值的测定

A.5.1 试剂和材料

A.5.1.1 无水乙醇。

A.5.1.2 石油醚。

A.5.1.3 氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液：c(KOH)=0.1mol/L。

A.5.1.4 酚酞指示液：10g/L。

A.5.2 分析步骤

准确称取约2g试样，精确到0.001g，溶于50mL由等体积无水乙醇和石油醚组成的混合溶剂中(该混合溶剂预先用氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液滴定至中性)，若试样不能完全溶解，则加热到约90℃以确保试样完全溶解。加入0.5mL酚酞指示液，立即用氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液滴定，滴定至溶液呈淡粉色并维持30s不褪色即为滴定终点。

A.5.3 结果计算

酸值(以KOH计)W3以毫克每克(mg/g)计，按公式(A.3)计算：

式中：

V——试样所消耗氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)；

c——氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液的实际浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；

M——氢氧化钾的摩尔质量，单位为毫克每毫摩尔(mg/mmol)[M(KOH)=56.1]；

m——试样的质量，单位为克(g)。

实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(三)》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。