A.6 杂质的测定

A.6.1 方法提要

用高效液相色谱法，在选定的工作条件下，通过色谱柱使样品溶液中各组分分离，用紫外吸收检测器检测，外标法定量，得到样品中各杂质的含量。

A.6.2 试剂和材料

A.6.2.1 对羟基苯甲酸甲酯钠：色谱纯，质量分数≥95%。

A.6.2.2 对羟基苯甲酸：质量分数≥99%。

A.6.2.3 甲醇。

A.6.2.4 冰乙酸溶液：1→100。

A.6.3 仪器和设备

A.6.3.1 高效液相色谱仪(HPLC)：配有紫外光检测器。

A.6.3.2 进样器：自动进样器或50uL微量进样器。

A.6.3.3 数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。

A.6.4 色谱分析条件

推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.1，其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。

表A.1 色谱柱和典型色谱操作条件

A.6.5 分析步骤

A.6.5.1 对羟基苯甲酸甲酯钠和对羟基苯甲酸混合溶液的制备

分别称取适量对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸，用流动相溶解、摇匀并稀释，制成各含对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸0.1mg/mL的混合溶液。

A.6.5.2 样品溶液的制备

称取适量样品，用流动相溶解并稀释，制成1.0mg/mL的样品溶液。

A.6.5.3 对照溶液的制备

准确量取样品溶液适量，用流动相稀释，制成10ug/mL的对照溶液。

A.6.5.4 测定

按高效液相色谱操作规程调节仪器，使基线平稳，进样20uL对羟基苯甲酸甲酯钠和对羟基苯甲酸混合溶液溶液，记录色谱图，理论板数按对羟基苯甲酸甲酯钠峰计算不低于8000，对羟基苯甲酸甲酯钠峰与对羟基苯甲酸峰的分离度大于1.5。进样20uL对照溶液，调节检测灵敏度，使羟基苯甲酸甲酯钠峰峰高约为满量程的20%。分别准确进样20uL对照溶液和样品溶液，记录色谱图至对羟基苯甲酸甲酯钠峰保留时间的4倍。

A.6.6 结果计算

样品溶液色谱图中如有对羟基苯甲酸峰，其峰面积不得大于对照溶液中对羟基苯甲酸甲酯钠峰面积的4倍。其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中对羟基苯甲酸甲酯钠峰面积的0.5倍。其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中对羟基苯甲酸甲酯钠峰面积。

A.7 溶液的澄清度与颜色

A.7.1 试剂和材料

A.7.1.1 比色用重铬酸钾溶液的制备

称取0.4000g在120℃干燥至恒量的基准重铬酸钾，置于500mL容量瓶中，加适量水溶解并稀释至刻度，摇匀。该溶液含重铬酸钾(K₂Cr₂O₇)0.800mg/mL.

A.7.1.2 比色用硫酸铜溶液的制备

称取约32.5g五水合硫酸铜，精确至0.01g，加适量盐酸溶液(1→40)溶解，转入500mL容量瓶中，用盐酸溶液(1→40)稀释至刻度。准确量取10.0mL该溶液于碘量瓶中，加50mL水和4mL乙酸、2g碘化钾，用硫代硫酸钠标准滴定溶液[c(Na2S2O3)=0.1mol/L]滴定，近终点时，加2mL淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，记录消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积数。每1mL硫代硫酸钠标准滴定溶液相当于24.97mg的五水合硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)。根据上述滴定结果，在剩余的硫酸铜溶液中加入适量盐酸溶液(1→40)，配制成含五水合硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)62.4mg/mL溶液。

A.7.1.3 比色用氯化钴溶液的制备

称取约32.5g六水合氯化钴，精确至0.01g，加适量盐酸溶液(1→40)溶解，转入500mL容量瓶中，用盐酸溶液(1→40)稀释至刻度。准确量取2.0mL该溶液于锥形瓶中，加200mL水摇匀，加氨水溶液至氯化钴溶液由浅红色变为绿色，加10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH6.0)，加热至60℃，加5滴二甲酚橙指示液，用乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液[c(EDTA)=0.05mol/L]滴定至溶液显黄色，记录消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积数。每1mL乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液相当于11.90mg的六水合氯化钴(CoCl₂·6H₂O)。根据上述滴定结果，在剩余的氯化钴溶液中加入适量盐酸溶液(1→40)，配制成含六水合氯化钴(CoCl₂·6H₂O)59.5mg/mL溶液。

A.7.1.4 标准比色液的制备

准确量取22.5mL比色用氯化钴溶液、12.5mL比色用重铬酸钾液、20.0mL比色用硫酸铜溶液和45.0mL水，混合摇匀，作为标准比色液的贮备液。准确量取1.5mL标准比色液贮备液，加8.5mL水，混合摇匀，得标准比色液。

A.7.2 分析步骤

称取1.0g试样，置于25mL纳氏比色管中，加10mL水溶解，溶液应澄清。另取标准比色液10mL，置于另一25mL纳氏比色管中两管同置白色背景下，自上向下透视，或同置白色背景前，平视观察，试样溶液呈现的颜色不得深于标准比色液颜色。

A.8 铅的测定

按GB 5009.12-2010中“石墨炉原子吸收光谱法”或“火焰原子吸收光谱法”进行。其中，试样不需预处理，试样消解可根据实验室条件选用“干法灰化”或“湿式消解法”进行，并视样品情况将试样溶液进行适当的稀释。

相关链接：食品添加剂对羟基苯甲酸甲酯钠检验方法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(四)》

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