A.4 总酚测定

A.4.1 方法提要

福林(Folin)试剂在碱性条件下极不稳定，可使酚类化合物还原而呈蓝色反应。在对羟基苯甲酸浓度0.0005mg/mL～0.016mg/mL范围内，其浓度与吸光度符合比尔定律，可用对羟基苯甲酸为对照品进行定量比色测定得试样的总酚含量。

A.4.2 试剂和材料

A.4.2.1 乙醇水溶液(3+7)。

A.4.2.2 乙醇水溶液(9+1)。

A.4.2.3 碳酸钠溶液：200g/L。

A.4.2.4 对羟基苯甲酸标准品：纯度≥98.0%。

A.4.2.5 对羟基苯甲酸标准溶液：0.250mg/mL，称取干燥至恒重的对羟基苯甲酸标准品25.0mg，用乙醇水溶液(A.4.2.1)溶解并定容至100mL。

A.4.2.6 福林试剂(自行配制或外购)：于2000mL磨口烧瓶中放入100g钨酸钠(Na₂WO₄·2H₂O)、25g钼酸钠(Na₂MoO₄·2H₂O)、700mL水、50mL 85%磷酸(HPO₄)、100mL盐酸，小火沸腾回流10h，去除冷凝器后，加入50g硫酸锂(Li₂SO₄)、50mL水和数滴溴水(99%)，摇匀，在通风柜内进行，再煮沸15min以去除过量的溴，冷却后加水定容至1000mL，混合均匀，过滤。试剂呈金黄色，储存于棕色瓶内，使用时以1份原液于2份水稀释均匀。

A.4.3 仪器和设备

A.4.3.1 分光光度计。

A.4.3.2 万分之一电子天平：感量0.0001g。

A.4.3.3 移液枪(或移液管)。

A.4.3.4 容量瓶。

A.4.4 测定步骤

A.4.4.1 试样处理

准确称取竹叶抗氧化物试样100mg(精确至0.0001g)，水溶性产品用乙醇水溶液(A.4.2.1)溶解并定容至100mL，脂溶性产品用少量乙醇水溶液(A.4.2.2)溶解后、再用乙醇水溶液(A.4.2.1)定容至100mL；用定性滤纸过滤，即得试样溶液。

A.4.4.2 标准曲线的绘制

准确吸取对羟基苯甲酸标准溶液0mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.80mL、1.20mL，相当于对羟基苯甲酸0mg、0.0125mg、0.025mg、0.050mg、0.10mg、0.20mg、0.30mg移入25mL具塞试管中，分别用水稀释至10.0mL；各加入1.0mL福林试剂和2.0mL 20%碳酸钠溶液，试管在50℃±1℃的恒温水浴中加热30min，然后用水冷却并稀释至25mL。室温放置30min，用1cm比色杯测定745nm的吸光度。以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线或求取线性回归方程。

A.4.4.3 试样测定

准确吸取试样溶液1mL，按上述标准曲线制作中的操作步骤(A.4.4.2)于745nm处进行吸光度测定。根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的对羟基苯甲酸含量。

A.4.5 结果计算

总酚(以对羟基苯甲酸计)的质量分数w1按公式(A.1)计算：

式中：

m1——依据标准曲线计算出的待测液中总酚含量的数值，单位为毫克(mg)；

V2——待测液总体积的数值，单位为毫升(mL)；

m2——供试样取样质量的数值，单位为毫克(mg)；

V1——待测液分取体积的数值，单位为毫升(mL)。

实验结果以平行测定结果的算术平均值为准(保留一位小数)。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过5.0%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(四)》

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