A.1 安全提示

本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风柜中进行。

A.2 一般规定

本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

A.3 鉴别试验

A.3.1 化学试剂鉴别

A.3.1.1 试剂和材料

A.3.1.1.1 乙醇水溶液(95+5)。

A.3.1.1.2 三氯化铁乙醇溶液：10g/L。

A.3.1.1.3 三氯化铝乙醇溶液：10g/L。

A.3.1.2 鉴别方法

A.3.1.2.1 称取约0.5g试样溶于100mL乙醇中，取此溶液1mL滴加2～3滴三氯化铁乙醇溶液，溶液显深蓝色或蓝紫色。

A.3.1.2.2 称取约0.5g试样溶于100mL乙醇中，取此溶液1mL滴加2～3滴三氯化铝乙醇溶液，溶液显鲜黄色。

A.3.2 光谱学鉴别

A.3.2.1 红外透射光谱鉴别

采用溴化钾压片法，按照GB/T6040的规定进行试验，试样的红外光谱应与对照图谱一致。

A.3.2.2 紫外吸收光谱鉴别

称取约15mg试样溶于100mL色谱纯甲醇中，在200nm～600nm波长范围内进行紫外扫描，试样的紫外光谱应与对照图谱一致。

A.3.3 有效成分分析及其指纹图谱

A.3.3.1 方法提要

试样用色谱纯甲醇溶解，以乙腈-乙酸水溶液(1+99)为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二级管阵列检测器，用含异草苷、草苷、异牡荆苷、牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸等八个对照品的标准图谱和试样图谱进行对照，确定竹叶抗氧化物产品的有效成分及类别差异。

A.3.3.2 试剂和材料

A.3.3.2.1 乙腈(色谱纯)。

A.3.3.2.2 甲醇(色谱纯)。

A.3.3.2.3 冰乙酸(优级纯)。

A.3.3.2.4 水(超纯水)。

A.3.3.2.5 异荭草苷、药草苷、异牡荆苷、牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸标准品：纯度≥98.0%。

A.3.3.2.6 混标溶液：分别称取上述8个对照品(A.3.3.2.5)各5mg(精确至0.0001g)，用甲醇溶解并定容至10mL，混匀，置冰箱中保存，此溶液为八个对照品的混标溶液。

A.3.3.3 仪器和设备

A.3.3.3.1 高效液相色谱仪。

A.3.3.3.2 紫外光检测器：可变波长。

A.3.3.3.3 数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。

A.3.3.4 参考色谱条件

推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.1，竹叶抗氧化物指纹图谱测定典型高效液相色谱图。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。

表A.1 色谱柱和典型色谱操作条件

A.3.3.5 分析步骤

A.3.3.5.1 试样处理

准确称取试样100mg(精确至0.0001g)，用甲醇溶解并定容至100mL，经微孔滤膜(0.45um)过滤，即得试样溶液。

A.3.3.5.2 试样测定

准确吸取试样溶液10uL，在规定色谱条件下，进行色谱分析，以保留时间定性。试样的高效液相色谱图应与对照图谱一致。

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文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(四)》

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