A.1 一般规定

本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

A.2 鉴别试验

A.2.1 甜菊苷和瑞鲍迪苷A试验

在甜菊糖苷含量试验中，试样溶液的液相色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A两个主峰应与混合标准溶液的色谱图相对应。

A.2.2 试样溶液的pH

称取1g试样，溶于100mL水中，用酸度计测定试样溶液的pH在4.5～7.0。

A.3 甜菊糖苷含量的测定

A.3.1 方法一

A.3.1.1 试剂和材料

A.3.1.1.1 乙腈：色谱纯。

A.3.1.1.2 磷酸二氢钠：色谱纯。

A.3.1.1.3 磷酸：色谱纯。

A.3.1.1.4 水：GB/T6682-2008中规定的一级水。

A.3.1.1.5 乙腈水溶液：乙腈和水的体积比为30：70。

A.3.1.1.6 磷酸钠缓冲液(pH2.6)：称取1.20g磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)，溶于800mL水中，用磷酸调节pH至2.6。

A.3.1.1.7 甜菊苷标准品：甜菊苷含量(质量分数，以干基计)≥99.0%。

A.3.1.1.8 瑞鲍迪苷A标准品：瑞鲍迪苷A含量(质量分数，以干基计)≥99.0%。

A.3.1.1.9 其他7种糖苷标准品：瑞迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷。

A.3.1.2 仪器和设备

高效液相色谱仪：配备紫外检测器，或其他等效的检测器。

A.3.1.3 参考色谱条件

A.3.1.3.1 色谱柱：C₁₈反相色谱柱，250mm×4.6mm，粒径5μm；或其他等效的色谱柱。

A.3.1.3.2 流动相：乙腈：磷酸钠缓冲液-32：68。

A.3.1.3.3 流动相流速：1.0mL/min。

A.3.1.3.4 检测波长：210nm。

A.3.1.3.5 进样量：2uL～10uL。

A.3.1.3.6 柱温：40℃。

A.3.1.4 分析步骤

A.3.1.4.1 混合标准品溶液的制备

分别称取适量甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷标准品，置于同一个容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定9种糖苷的相对保留时间。

A.3.1.4.2 标准溶液的制备

分别称取0.05g甜菊苷标准品和瑞鲍迪苷A标准品，精确至0.001g，分别置于50mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到甜菊苷标准溶液和瑞鲍迪苷A标准溶液。

A.3.1.4.3 试样溶液的制备

称取0.05g～0.1g试样，精确至0.001g，置于50mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液。

A.3.1.5 测定

在A.3.1.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液、标准溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷的峰面积及标准溶液色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A的峰面积。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(四)》

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