(2)微生物法(microbiological analysis)

微生物效价法是利用样品中抗生素抑制特定菌株的生长来检测抗生素的方法，是当前各国药典推荐的测定抗生素的主要方法。微生物法具有操作简单、花费少等优点，而且微生物法多利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，根据量反应平行线原理，比较标准品与供试品对接种试验菌产生抑菌圈的大小来定量确定残留量。因此，在实际检测中，微生物法的影响因素较多，菌种不易筛选，精确度和灵敏度较低。但微生物法不需要大型仪器、样品可批量处理，如能开发出合适的样品前处理方法，微生物法也有一定的应用前景。该法在AGs检测中有一定的应用，主要有杯碟法、棉拭法、纸片法和氯化三苯基四氮唑法。

1)杯碟法(cylinder plate method)

我国出入境检验检疫行业标准SN 0536-19963采用杯碟法检测肉中卡那霉素残留量，最低检测限为0.5mg/kg，样品加标回收率为83.7%～97.0%。蔡金华等用10%的三氯乙酸提取牛奶中的链霉素，冷冻离心分离，用枯草芽孢杆菌作为检定菌进行测定，在添加浓度0.2mg/kg、0.8mg/kg和1.6mg/kg水平的平均回收率为97.6%。陈光哲等用pH 1.5的抽提缓冲液浸泡、均质、离心、沉淀样品，在样品中的链霉素被抽提后，吸取上清液注入牛津杯，与含枯草杆菌液的检定平板贴合，培养，根据抑菌圈有无及大小判定结果，对照标准曲线，求得链霉素的残留量，检测低限为1.25ug/kg。王苏华等以葡萄球菌为测试菌种，琼脂扩散法检测鸡蛋中的新霉素，获得的最低检出限为0.25mg/kg。

2)棉拭法(sweb test on premises， STOP)

棉拭法是检测胴体内可疑抗生素残留的现场试验方法。在美国、加拿大等国家，试剂已商品化，可从肾脏、肝脏、肌肉采样，通过棉拭周围有无抑菌圈和大小判定抗生素的残留。王琴等采用棉拭法测定实验鸡蛋黄、蛋清中残留的青霉素和链霉素。棉拭法简便易行，在几分钟内即可完成操作，16～18h即可获得结果，是简便而又有一定准确性的检测动物组织内抗生素残留的方法。

3)纸片法(paper disc，PD)

这是目前常用的一种方法。用圆滤纸从肾脏(或乳)取样，与含有枯草杆菌等细菌的营养琼脂贴合、培养，观察抑菌圈大小检查有无抗生素残留，本法具有广域的灵敏性。杨文友等筛选枯草芽胞杆菌、藤黄八叠球菌、蜡样芽孢杆菌三株试验菌株，分别制备营养琼脂检测平板。标准抗菌性物质，对三株试验菌株敏感性不同，分为青霉素、链霉素、四环素(氯霉素)、磺胺、呋喃等五类。采取肾、肝、肌肉组织，直接滤纸片法，32℃±1℃，15～18h，培养，呈抑菌圈者，表示抗菌性物质残留阳性。建立的抗菌性物质残留简易生物分类快速筛选方法简便、省时、省费用、灵敏度高，回收良好，为确证提供了线索。

4)氯化三苯基四氮唑法(tripheye tetrazollium chloride, TTC)

TTC与抗生素反应的显色作用可以检测抗生素残留,其原理是嗜热链球菌在牛乳中生长时会将无色的TTC还原为红色的三苯甲唑。当牛奶中存在抗生素时，会抑制嗜热链球菌的生长，TTC则无法被还原。黄怡君等用TTC法检测了牛奶中的抗菌药物，链霉素、庆大霉素和卡那霉素的最低检测浓度分别为660ug/kg、620ug/kg和6200ug/kg。但是TTC法检测时间较长，灵敏度低。

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文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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