5.2.5.7 分析条件的选择

(1)固相萃取柱的选择

在本方法的研究中，用OasisHLB固相萃取柱、BUNDELUT C₁₈固相萃取柱、ENVI-18固相萃取柱、Octadecyl C₁₈固相萃取柱、LiChrolutEN固相萃取柱和Sep-Pak C₁₈固相萃取柱共六种固相萃取柱对5种头孢菌素的提取效率和净化效果进行了比较。实验发现，Sep-Pak C18固相萃取柱回收率低(只有50%～60%)，且净化效果也不理想，Sep-Pak C₁₈固相萃取柱不适合本方法。ENVI-18固相萃取柱、LiChrolutEN固相萃取柱和Octadecyl C₁₈固相萃取柱的回收率均好，但样品溶液过柱速度较慢，样品预处理时间长，有的还存在着不同批次之间回收率的不稳定。OasisHLB固相萃取柱、BUNDELUT C₁₈固相萃取柱对5种头孢菌素的提取效率和净化效果较好，5种头孢菌素回收率的重现性也优于其他固相萃取柱。而OasisHLB固相萃取柱样品溶液过柱速度优于BUNDELUT C₁₈固相萃取柱，因此，本方法选用OasisHLB固相萃取柱作为样品净化柱。

(2)提取溶液的选择

在本方法的研究中，根据蜂蜜样品的特点和被测物的性质，确定磷酸二氢钠缓冲溶液作为提取液。通过回收率实验，比较了提取液中磷酸二氢钠缓冲溶液浓度和pH值对5种头孢菌素回收率的影响，结果见表5-37和表5-38。

表5-37 提取液浓度对5种头孢菌素回收率(%)的影响

表5-38 提取液pH对5种头孢菌素回收率(%)的影响

从表5-37和表5-38可以看出，当提取液中磷酸二氢钠浓度为0.15mol/L，pH为8.5时，5种头孢菌素回收率最佳，因此，本方法使用pH8.5，0.15mol/L磷酸二氢钠溶液作为提取液。

(3)固相萃取柱洗脱条件的选择

本方法比较了用1mL、2mL、3mL乙腈作为固相萃取柱的洗脱剂，对5种头孢菌素回收率产生的影响，结果见表5-39。实验表明，当洗脱剂用量为2mL时，5种头孢菌素的回收率为94.5%～98.7%。当洗脱剂用量为3mL时，5种头孢菌素回收率没有明显改善。因此，本方法选用2mL乙腈作为固相萃取柱的洗脱剂。

表5-39 固相萃取柱洗脱剂用量对回收率(%)的影响

(4)液相色谱分析柱的选择

分别使用uBondapak C₁₈ 300mm×4.0mm色谱柱和ZORBAXSB- C₁₈ 3.5um 150mm×2.1mm色谱柱对5种头孢菌素的色谱行为进行了比较。实验发现，这两种色谱柱的灵敏度均能满足要求，但μBondapak C₁₈ 300mm×4.0mm色谱柱流速在1.5mL/min，进质谱仪之前必须分流，而分流时对5种头孢菌素结果的测定产生一定误差，而使用ZORBAXSB-C₁₈ 3.5μm150mm×2.1mm柱不需分流，定量准确度优于μBondapak C₁₈柱，通过以上对两种色谱柱的比较，本方法选用ZORBAXSB-C₁₈ 3.5um 150mm×2.1mm为5种头孢菌素的分析柱。

(5)质谱条件的确定

采用注射泵直接进样方式，以5μL/min分别将头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟标准溶液注入离子源，用正离子检测方式对5种头孢菌素进行一级质谱分析(Q1扫描)，得到质子化分子离子峰分别为456、424、348、459、529，再对分子离子进行二级质谱分析(子离子扫描)，得到碎片离子信息。然后对去簇电压(DP)，碰撞气能量(CE)，电喷雾电压、雾化气和气帘气压力进行优化，使分子离子与特征碎片离子对强度达到最佳。然后将质谱仪与液相色谱联机，再对离子源温度，辅助气流速进行优化，使样液中5种头孢菌素离子化效率达到最佳。

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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