9.2.5.7 分析条件的选择

(1)色谱分离条件的选择

采用反相C₁₈柱分离，以乙腈-水作流动相，并采用梯度洗脱，结果发现，玉米赤霉醇及其代谢物的分离效果满意。

(2) 质谱条件的选择

串联质谱采用MRM模式检测，β-玉米赤霉醇：选择离子对m/z321.1→277.2和m/z321.1→303.2作为定性离子，
m/z321.1→277.2作为定量离子(峰强度最大)；a-玉米赤霉醇：选择离子对m/z321.1→277.2和m/z321.1→303.2作为定性离子，m/z321.1→277.2作为定量离子；玉米赤霉烷酮：选择离子对m/z319.1→275.1和m/z319.1→301.1作为定性离子，m/z319.1→275.1作为定量离子。

(3)定性、定量方法.

进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准品的保留时间偏差在±2.5%之内，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，误差不超过表1-5规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。选择丰度最大的特征子离子的峰面积，按外标法定量。

9.2.5.8 标准曲线及测定低限

采用外标法定量时，为了消除基体对检测的影响，通常采用与待测样品相同或相近的基体标准溶液予以校正。因此，以空白样品的基体配制工作溶液，在浓度1～100μg/L范围内(n=5)，得到浓度与峰面积呈良好线性，线性相关系数(r)大于0.998。

根据回收率试验，能定量测得的最低浓度为测定低限(LOQ，S/N>10)，LOQ为1μg/kg，其满足最高限量(1μg/kg)的检测要求。以下分别为空白样品和添加样品(1μg/kg)的色谱图。

9.2.5.9 方法回收率和精密度

取适量标准品加入到5g空白样品中，使添加量相当于1μg/kg、2μg/kg、5μg/kg和10μg/kg，进行样品处理和测定，采用外标法计算回收率。制作工作曲线时应与添加样品同时进行，以空白样品的基体配制标准液。表9-30为回收率结果，由表9-30可见，加标平均回收率为68.2%～82.0%，相对标准偏差(RSD)为7.7%～12.5%。

9.2.5.10 重复性和再现性

在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，试样中β-玉米赤霉醇、玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮的添加浓度范围及重复性方程见表9-31。如果两次测定值的差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，试样中β-玉米赤霉醇、玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮的含量范围及再现性方程见表9-31。

表9-30 方法回收率和精密度(n=10)

表9-31 含量范围及重复性和再现性方程

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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