22.3.1.7 分析条件的选择

(1)样品前处理方法的优化

对于传统的QuEChERs方法，其普遍采用振荡提取的方式。这种提取方式便于样品的批量处理，从而提高前处理效率。但通过实验结果发现，肉类基质本身含脂量较高，振荡提取后，基质呈球状未能充分分散，从而影响了提取效率。因此，实验进一步比较了匀浆和超声提取，结果发现匀浆提取取得了最好的结果，回收率在70%～120%兽药占总数的94.5%。实验最终选择匀浆提取作为本方法的提取方式。

对于水果蔬菜样品，原始的QuEChERs前处理普遍采用NaCl作为盐析剂，MgSO₄作为吸水剂。由于本方法采用有机溶剂直接提取，NaCl在本方法中的作用主要是辅助细胞破碎和目标物溶出。此外，NaCl的另一个作用是将样品中的水分充分析出，从而有利于吸水剂的吸附。而原始方法选择MgSO₄作为吸水剂主要是由于MgSO₄具有更强的吸水能力。但实验表明MgSO₄的使用会明显降低部分兽药的回收率，特别是喹诺酮类药物，见图22-27。因此，实验选择Na₂SO₄来替代MgSO₄作为吸水剂。实验结果表明Na₂SO₄获得了较高的回收率结果。

对于兽药残留检测，文献报道的提取溶剂主要有乙腈、醋酸乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲醇等溶液。实验对这些常用提取溶剂的提取效率进行了比较。结果发现乙酸乙酯、二氯甲烷溶液提取了更多的脂类物质，提取液不易净化及后续操作。此外，甲醇溶液也未取得理想的提取效果，其提取液在氮吹浓缩步骤不能完全吹干，这主要与甲醇沉淀蛋白的效果欠佳有关。而采用乙腈和醋酸乙腈溶液时，共提物较少，并且通过测定发现，醋酸乙腈溶液取得了最好的提取效果。

实验进一步对乙腈溶液中醋酸的比例进行摸索，考察不同条件下其对回收率影响。如图22-28所示，结果表明采用5%醋酸乙腈溶液提取时，55种兽药的平均回收率获得了最优的结果，回收率在70%～120%曾药占比为92.7%，大多数兽药回收率随酸度的升高而升高，特别是对于喹诺酮类药物；与之相反，也有少数兽药的回收率随之降低，如大环内酯类药物，但其回收率仍高于70%。因此最终确定5%醋酸乙腈溶液为本方法的提取溶剂。对提取体积进行优化，结果表明当提取剂体积为16mL时，取得了最好的结果，平均回收率为93.8%。

比较了十八烷基键合硅胶(C₁₈)、聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)、季铵盐键合聚合物(PAX)、磺酸基键合聚合物(PCX)和乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)5种吸附剂对于肉类基质的净化效果并进行了回收率测定。如图22-29所示，从回收率角度看，C₁₈吸附剂取得最好的效果，净化样品平均回收率为94.5%，PAX和PEP净化的样品平均回收率分别为78.8%和86.6%。PSA和PCX对喹诺酮和磺胺类药物产生了吸附，因此未得到理想的结果。并且C₁₈吸附剂有利于去除肉类基质中的脂肪。考虑回收率和净化效果这两方面原因，最终选择C₁₈作为方法的吸附剂。实验对C₁₈吸附剂的用量进行了优化，当吸附剂用量为400mg时，得到了最优的结果，回收率在70%～120%之间的占比为92.7%。因此，最终确定C₁₈吸附剂的用量为400mg。

表22-6 55种兽药质谱参数及检出限

图22-27 MgSO₄和Na₂SO₄对喹诺酮类药物回收率的影响(n=3，Mean±SD)

图22-28 不同酸度提取溶剂对回收率的影响(n=3，Mean±SD；ACN为乙腈，HAc为醋酸)

图22-29 不同吸附剂对回收率的影响

相关链接：猪肉、牛肉和羊肉中55种兽药多组分残留测定步骤

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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