一、目的和要求

(1) 了解从土样中提取有机氯农药的方法。

(2）掌握气相色谱法的定性、定量方法。

(3）了解气相色谱仪的结构及操作技术。

二、原理

六六六农药有7种顺、反异构体（(a、β、γ、δ、ε、η和θ，也称甲体、乙体、丙体、丁体、戊体、己体和庚体）。一般只检测前4种异构体。它们的物理化学性质稳定，不易分解，且具有水溶性低、脂溶性高、在有机溶剂中分配系数大的特点。因此，本法采用有机溶剂提取，浓硫酸纯化以消除或减少对分析的干扰，然后用电子捕获检测器进行检测。用标准化合物的保留时间定性，用峰高外标法定量。

三、仪器与试剂

(1) 附有电子捕获检测器的气相色谱仪。

(2）水分快速测定仪。

(3) 250mL脂肪提取器。

(4）微量注射器。

(5) 石油醚。沸程60-90℃，重蒸馏，色谱进样无干扰峰。

(6) 丙酮。重蒸馏，色谱进样无干扰峰。

(7) 无水硫酸钠。300℃烘4h，放入干燥器中备用。

(8) 2％硫酸钠溶液。

(9) 30-80目硅藻(celite) 。

(10) 脱脂棉。用石油醚回流4h后，干燥备用。

(11) 滤纸筒。适当大小的滤纸用石油醚回流4h后，干燥后做成筒状。

(12) a-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六标准溶液。将色谱纯a-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六用石油醚配制成200mg/L的储备液，石油醚配制成适当浓度的使用标准溶液。注意在配制19-六六六标准溶液时，先用少量苯溶解。

四、实验步骤

1．土样的提取

称取经风干过60目筛的土壤20. 00g（另取10. 00g测定水分含量）置于小烧杯中，加2mL水、4g硅藻土，充分混合后，全部移入滤纸筒内，上部盖一滤纸，移入脂肪提取器中。加入80mL石油醚一丙酮混合溶液（1：1)浸泡12h后，加热回流提取4h。回流结束后，使脂肪提取器上部有集聚的溶剂。待冷却后将提取液移入500mL分液漏斗中，用脂肪提取器上部溶液，分3次冲洗提取器烧瓶，将洗涤液并入分液漏斗中。向分液漏斗中加入300mL 2％硫酸钠水溶液，振摇2min，静止分层后，弃去下层丙酮水溶液，上层石油醚提取液供纯化用。

2．纯化

在盛有石油醚提取液的分液漏斗中，加入6mL浓硫酸，开始轻轻振摇，并不断将分液漏斗中因受热释放的气体放出。以防压力太大引起爆炸，然后剧烈振摇lmin。静止分层后弃去下部硫酸层。用硫酸纯化的次数，视提取液中杂质多少而定，一般为1-3次。然后加入100mL 2％硫酸钠水溶液，振摇洗去石油醚中残存的硫酸。静置分层后，弃去下部水相。上层石油醚提取液通过铺有l cm厚的无水硫酸钠层的漏斗（漏斗下部用脱脂棉支撑无水硫酸钠），脱水后的石油醚收集于50mL容量瓶中，无水硫酸钠层用少量石油醚洗涤2-3次。洗涤液也收集于上述容量瓶中，加石油醚稀释至标线，供色谱测定。

3．气相色谱测定

1) 分析条件

检测器：电子捕获检测器。

色谱柱：DB-5毛细管柱，长30m。

柱箱温度：初始温度为60℃,以20℃/min升温速率升至180℃，再以10℃/min升温速率升至240℃。

汽化室温度：250℃。

检测器温度：300℃。

载气：氦气。

流速：1. 8mL/min。

2) 色谱分析

首先用微量进样器从进样口定量注入各六六六标准样，各2次。记录进样量、保留时间及峰高或面积，计算时用平均值。再用同样的方法对样品进行进样分析，并进行记录。

五、数据处理

(1) 以表格形式记录色谱的操作条件和标样测试结果。

(2）以表格形式记录土样测定结果，并按下列公式计算六六六各异构体的量：

c样(μg/kg)=（H样×c标×Q标）/（H标×Q样×R×K）

式中：c样——样品中六六六的含量，μg/kg;

H样——样品中相应峰高，mm;

H标——标准溶液峰高，mm;

c标——标准溶液浓度，μg/L;

Q标——标准溶液进样量，5μL;

Q样——样品进样量，5μL;

R——相应化合物的添加回收率，％；

K——样品提取液的体积相当于样品的质量，kg/L，本法中

K=[20.00×(1 - w)]/50

式中：w——土壤中水分的质量分数，％。

六、注意事项

(1) 进样量要准确，进样动作要迅速，每次进样后，注射器一定要用石油醚洗净，最好用氮气流冲干净，避免样品互相污染，影响测定结果。

(2) 纯化时出现乳化现象可采用过滤、离心或反复滴液的方法解决。

(3) 如果土样中六六六异构体浓度较低，则纯化的石油醚提取液用K-D液浓缩器浓缩至相应体积。

(4）相应化合物的添加回收率，可用相应浓度的该化合物标样添加到土样中测定。