最早是在1973年开始采用的。这种方法首先由Graham和Van derEbb使用，后由Wigler修改而成。可广泛用于转染许多不同类型的细胞，不但适用于短暂表达，也可生成稳定的转化产物。沉淀颗粒的大小和质量，对于转染的成功至关重要，pH、Ca2＋离子浓度、DNA浓度、沉淀反应时间、细胞孵育时间，以及各组分加入顺序和混合的方式等都可能对转染结果产生影响，本方法的重复性欠佳。

实验原理

磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物，并将DNA导入真核细胞的转染方法，磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面结合。磷酸钙-DNA复合物赫附到细胞膜表面并通过胞饮作用进入靶细胞内，被转染的DNA可以整合到靶细胞的染色体中，从而产生有不同基因型和表型的稳定克隆。

材料（试剂及设备）

（1）缓冲液与溶液CaCl2 (2.5mo1/L，过滤除菌，-20℃保存备用）；100mmol/L氯喹（选用）；Giemsa染液（10% W/V，新鲜配制、Whatman 1号滤纸过滤）；甘油（15% V/V) ; 2×HEPES缓冲液：50. 0mmol/L HEPES、280mmol/L NaCl、10mmol/L KCl、1. 5mmol/L葡萄糖，用0. 5mmo1/L NaOH调pH至6.95-7.05、过滤除菌后，-20℃保存备用；甲醇；磷酸盐缓冲液（PBS，配方参考分子克隆实验指南）；丁酸钠（500mmoUL，备选）。

(2）核酸与寡核苷酸质粒DNA：转染前，将所要转的质粒在细胞室内无菌沉淀（1/10体积的3mol/L NaAC, 2倍体积的无水乙醇），在超净台中用70％的乙醇（无水乙醇与灭菌水在无菌状态下配制）清洗2次，晾干，加灭菌水溶解。用0. 1×TE (pH 7.6）溶解DNA至终浓度25μg/ml，每毫升培养基需要50μl质粒溶液。

(3) 培养基为完全培养基。

(4）其他设备细胞培养用培养箱（37℃, 5% CO2的加湿培养箱）、超净台、冰箱、离心机、Vortex振荡器（选用）、1. 5m1 EP管、移液器及tip头、试管架、计时器和60mm组织培养皿或12孔板。

(5）细胞指数生长的哺乳动物细胞培养物。细胞准备：转染前一到两天，将细胞传代至平皿中（视目的不同所用平皿规格不同），使细胞密度在做转染时达到所需密度（具体细胞密度视细胞生长速度而定，标准是在收细胞时细胞密度达到100%）。

转染方法

(1）在所要转染的DNA中加50μ12. 5mo1/L CaCl2。

(2）在500 μ12 × HEPES溶液中逐滴加入DNA-CaC12溶液，用移液器吹打溶液，至DNA-CaCl2溶液滴完，整个过程需缓慢进行，至少需持续1-2min。

(3）室温静置30min，出现细小颗粒沉淀。

(4）将沉淀逐滴均匀加入细胞培养板中，轻轻晃动混匀。

(5）在标准生长条件下培养细胞4-16h。除去培养液，用l×HEPES洗细胞2次，加入完全培养液培养细胞。