脂质体转染方法始于1987年，这个方法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高，并广为使用。阳离子脂质体的细胞毒性相对较高，对不同的细胞可能会干扰细胞的代谢。血清的存在有可能会影响转染效率，需要进行优化。

实验原理

中性脂质能利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA -阳离子脂质体复合物。据认为一个约5 kb的质粒会结合2-4个阳离子脂质体，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入培养的细胞。

材料（试剂及设备）

(1) 缓冲液与溶液转染试剂：脂质体；0.9％的NaCl溶液（选用）：用于稀释DNA和／或转染试剂。

(2）核酸与寡核苷酸质粒准备：第一次做阳性对照一般用绿色荧光蛋白的表达质粒，阴性对照用所要表达蛋白的载体。转染前，先将所要转染的质粒在细胞室内进行无菌沉淀（1/10体积的3mo1/L NaAC,2倍体积的无水乙醇），在超净台中用70％的乙醇（无水乙醇与灭菌水在无菌状态下配制）清洗2次，晾干，加灭菌水溶解。一般用灭菌水稀释成1μg/μl。

(3）培养基细胞生长培养基可分为完全培养基，无血清或无抗生素培养基。

(4) 其他设备细胞培养用培养箱（37℃, 5% CO2的加湿培养箱）、超净台、冰箱、细胞培养皿、离心机、Vortex振荡器（选用）、1. 5m1 EP管、移液器及tip头、试管架和计时器等。

(5) 细胞：指数生长的哺乳动物细胞培养物细胞准备：转染前一到两天，将细胞传代至平皿中（视目的不同所用平皿规格不同），使细胞密度在做转染时达到所需密度（具体细胞密度视转染试剂说明书及细胞生长速度而定，标准是在收细胞时细胞密度达到100%）。

转染方法具体请参照厂商提供的转染试剂使用说明书

(1) Ⅰ液：质粒加一定量的NaCl或双无的DMEM（无抗生素，无血清），混匀（用移液器吹打混匀或Vortex振荡混匀），静置5 min。

(2) II液：转染试剂加一定量的NaCl或双无的DMEM（无抗生素，无血清），混匀（用移液器吹打混匀或Vortex振荡混匀），静置5 min。注：具体加人培养基的量请参考转染试剂使用说明书。

(3) 将II液加入I液中，混匀、静置20min。在此期间，给细胞换液（吸弃旧的培养基，用PBS或者DMEM洗，加入一定数量的双无培养基）。注：加入培养基的量要参见转染试剂使用说明书。然后，将I，II液混合液加入已换液的细胞中。

(4) 换液：转染4-6h后，将细胞培养基换成完全培养基，将样品细胞放回孵育箱中，使之在正常条件下生长。