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真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构(m7 G)和3’端的Poly ( A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly ( A)尾,通常用Poly(A+)表示。
这种结构为真核mRNA的分离纯化提供了极为方便的选择性标志,寡聚(dT)纤维素或寡聚(dU)琼脂糖亲和层析,分离纯化mRNA的理论基础就在于此。
mRNA的分离方法较多,其中以寡聚(dT)- 纤维素柱层析法最为有效,已成为常规方法。
此法利用mRNA 3’末端含有Poly ( A+)的特点,在RNA流经寡聚(dT)纤维素柱时,在高盐缓冲液的作用下,mRNA被特异地结合在柱上,当逐渐降低盐的浓度时或在低盐溶液和蒸馏水的情况下,mRNA被洗脱,经过两次寡聚(dT)纤维柱后,即可得到较高纯度的mRNA。
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