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1) 在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳。
2)电泳液的配制:5×甲醛凝胶电泳缓冲液 1.0μl
甲醛 1. 8μ1
65℃温水水浴15 min
3)加入RNA溶液3μl,迅速进行冰浴冷却,加入1μl上样缓冲液。
上样缓冲液:0.25%溴酚蓝;0.25%二甲苯青FF ; 30%甘油。
4)含有甲醛的凝胶的配制:
向经过消毒处理的三角烧瓶中依次加入如下成分:琼脂0. 2g,甲醛3.57m1, DEPC水12. 5m1, 5×甲醛凝胶电泳缓冲液4. 0ml。
注意:进行微升级的药品加入时,应该将粘在EP管壁的液体用枪头引流至管底,加入后应反复吸液洗涤枪头。60℃微波加热1min,甲醛蒸气易挥发,且有较强烈刺激性。因此,在加热后一定要等待冷却后才能靠近,且加热时瓶口用封口膜封上。
5)冷却后加入1μlEB(注意:EB有剧毒,应该在通风橱中进行操作)。
6)将制备的凝胶倒入电泳槽中,并插入造孔梳,放在通风橱中静置。
7)装配电泳装置,将RNA样品小心加入凝胶的孔中,要求形成的凝胶不能有气泡,将气泡赶跑,利于每个泳道电流通过相同。另外加入量刚好填满凝胶槽为最佳。
8)接好电极,打开电源开关,调节电泳电压60V,开始进行RNA电泳。
9)电泳经过30-60min后,用凝胶成像系进行照相分析。
10)进行紫外分光光度计测定浓度,确定RNA的纯度。
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