TRIZOL法从组织或细胞中提取总RNA

1) 取样：称取待测l00mg新鲜组织，加入1 ml DEPC水冲洗，以使组织表面RNA酶失活。

2）样本移入研磨器中（研磨器最好不要太细的，否则研磨阻力较大，容易损坏），按照每50-100mg组织加入1 ml Trizol Reagent溶液，放在冰上将组织研磨碎。

3）研磨后的溶液转移至1. 5ml EP管中，于15-30℃培育5 min。

4）每1 ml Trizol Reagent加入0. 2ml氯仿，剧烈振荡15s，使氯仿充分从溶液中萃取RNA。

5）离心，12 000g，4℃，15min。

6）离心后，溶液共分3层，下层为红色的Trizol Reagent，中间层为水相，上层为有机相。RNA分布在最上层，将上清液转移到另外一只EP管中（取上清液的原则为宁少勿多，否则可能将下层带有DNA的液体取出，造成污染）。按照每1 ml Trizol Reagent加入0. 5m1异丙醇的比例，加入异丙醇，使RNA沉淀，室温下放置l0min。

7）离心，12 000g、4℃、10min。

8) 弃上清液，剩下胶状沉淀（实际为白色沉淀）即为RNA。

9）按照每1 ml Trizol Reagent加入I ml 75％乙醇清洗RNA。具体做法是：加入乙醇后，在涡漩振荡器上稍微振荡EP管之后，轻微敲打EP管，使沉淀脱离管壁（注意不要用力过猛，以免沉淀被振碎）。

10）离心，12 000g、 4℃、l 0min。

11) 弃上清液，沉淀在37℃空气中干燥，白色沉淀完全消失，成为无色的胶状固体后，表明干燥完毕。

12）每1ml Trizol Reagent加入20μ1 DEPC水，55-60℃温水水浴10min溶解RNA。

13) RNA溶液放置在冰上，等待后续实验。