在体内，应用含氖的甲硫氨酸可以标记细胞内甲基化的蛋白。这个实验根据S-腺苷甲硫氨酸上的甲基来源于细胞内游离的甲硫氨酸。细胞在蛋白合成抑制剂存在的情况下，用[甲基-3H]-L-甲硫氨酸标记，这样就避免同位素与新合成的蛋白质结合，只标记甲基化的蛋白。

然后与免疫共沉淀技术相结合，研究内源的蛋白在体内的甲基化情况。实验步骤如下：

（1) 将HeLa细胞接种到1Ocm的培养皿中，直至细胞密度达80%。

(2）用1×PBS洗后，加l0ml细胞培养液A.

(3）在培养箱中，37℃,孵育30 min。

(4）用l0ml细胞培养液B，洗一次细胞。

(5）再加5 ml含有50μXi L -[甲基-3H]-甲硫氨酸的细胞培养液B。

(6) 37℃培养箱孵育3h。

(7）用预冷的1×PBS洗细胞。

(8) 加500 μ1预冷的温和裂解液。

(9）用塑料细胞刮子将细胞从培养皿中刮下。

(10）收集到1. 5m1 Ep管中，4℃颠倒混匀30min。

（11）4℃10 000g离心l 0min，收集上清。

(12）在步骤6过程中，用预冷的温和裂解液洗20μl蛋白A/G琼脂糖珠。之后，在300μl裂解液中，分别加入各自的抗体1 Kg，再与洗好的蛋白A/G珠子混匀。

（13) 4℃颠倒混匀30min，使抗体与琼脂糖珠结合。

（14) 700g离心5s，吸弃上清。

(15）将步骤11中的上清加到琼脂糖珠中，颠倒混匀2 -4h。

(16) 700g离心5s，用预冷的温和裂解液洗3次琼脂糖珠。

（17）加20μ1 6×上样缓冲液，95℃加热5 min。

(18）将免疫共沉淀的产物进行SDS - PAGE，用Tris-甘氨酸缓冲液100V电泳lh。

(19）用半干转印法，将分离的样品转印到PVDF膜上。

(20) 将固定有蛋白的膜喷3次EN 3 HANCE，每次操作间隔10min。

(21）将PVDF膜晾30min至完全晾干，放置在X胶片上过夜。