1 范围

本标准规定了水产品中挥发酚残留量的分光光度测定方法。

本标准适用于水产品中可食部分挥发酚残留量的测定。

2 原理

用碱性溶液破坏样品组织结构，在酸性条件下用水蒸气蒸储出挥发酚类化合物，在铁氧化钾存在下，与4-氨基安替比林反应生成橙红色的安替比林染料，用三氯甲烷萃取，在460nm波长测定吸光度定量。

3 试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。

3.1试剂

3. 1. 1 三氯甲烷(CHCl3)

3. 1. 2 氨水(NH3•H2O)

3. 1. 3 硫酸(H2SO4)

3. 1. 4 氢氧化钠(NaOH)

3. 1. 5 铁氰化钾(K3[Fe(CN)6])

3. 1. 6 硫酸铜(CuSO4•5H2O)

3. 1. 7 甲基橙(C14H15N3NaO3S)

3. 1. 8 氯化铵(NHCl)

3. 1. 9 4-氨基安替比林(G1H13N3O)

3. 1. 10 活性炭粉末(粒径0.1mm〜0.5mm)

3. 2 试剂配制

3. 2. 1 无酚水：取实验用水，每升水中加入0.2g经200°C烘干30min的活性炭粉末，充分振摇后，放置过夜，用双层中速滤纸过滤后即可使用；或向实验用水中加氢氧化钠(NaOH)使水呈强碱性，并滴加高锰酸钾溶液至紫红色，移入全玻璃蒸馏器中加热蒸馏，取馏出液备用。无酚水应储于玻璃瓶中，取用时应避免与硅胶制品(橡皮塞或乳胶管等)接触。

3.2.2  50%硫酸溶液：将浓硫酸在搅拌下缓缓加入等体积的实验用水中。

3.2.3  10%氢氧化钠溶液：称取10g氢氧化钠溶于水中，稀释至100mL，混匀。

3.2.4  8%铁氰化钾溶液：称取8g铁氰化钾(K3[Fe(CN)6])溶于水中，稀释至100mL，混匀，4°C冷藏，可使用1周。

3.2.5  10%硫酸铜溶液：称取10g硫酸铜(CuSCU•5H2O)溶于水中，稀释至100mL，混匀。

3.2.6  0.05%甲基橙指示液：称取甲基橙0.05g溶于水中，稀释至100mL，混匀。

3.2.7  缓冲溶液：称取20g氯化铵(NHQ)溶于100mL氨水(NH3•H20)中，pH约10.7，4°C冷藏。

3.2.8  2%4-氨基安替比林溶液：称取2g 4-氨基安替比林(CnH13N3O)溶于水中，稀释至100mL，4°C冷藏，可使用1周。

3.3 标准品

苯酚标准品(C6H6O)，纯度≥99%。

3.4 标准溶液配制

3. 4. 1 标准储备溶液:称取苯酚0.01g（精确至0.1mg）于50mL小烧杯中，加无酚水溶解，再转移到100mL容量瓶中，定容，混匀，于4°C保存，苯酚质量浓度为100Mg/mL，有效期为7d。

3. 4. 2 标准工作液：取适量苯酚标准溶液，用无酚水稀释至每毫升含1.00 μg 苯酚，配制后要在2h内使用。

4 仪器和设备

4.1  水蒸气蒸馆仪或500mL玻璃水蒸气蒸馏装置（见附录A）。

4.2  天平：感量为0.1mg和0.01g。

4.3  500mL（梨形）分液漏斗。

4.4  磁力搅拌器。

4.5  分光光度计。

4.6  调温电炉或调温电加热套。

4.7  组织捣碎机。

5  分析步骤

5.1  试样制备及保存

水产品取可食部分用组织捣碎机匀浆后，搅拌均匀，分装，密闭冷藏或冷冻保存。

5.2 试样处理

5. 2. 1 蒸馏提取

称取预处理的样品10g〜20g（精确至0.01g，同时做空白试验）放烧杯中，加入氢氧化钠溶液75mL，用磁力搅拌器搅拌10min。再加3滴〜5滴甲基橙溶液，用硫酸溶液调节PH≤4（溶液呈橙红色），再加硫酸铜溶液5mL，混匀后，置于水蒸气蒸馏仪提取瓶或500mL蒸馏瓶中，用少量无酚水洗净烧杯，洗涤液并入水蒸气蒸馏仪提取瓶或蒸馅瓶中并加数粒玻璃珠。

使用玻璃水蒸气蒸馏装置（或水蒸气蒸馏仪）进行蒸馏，应连接好水蒸气蒸馏装置，确保严密不漏气，取250mL锥形瓶接收馏出液，中速蒸馏60min〜90min，至馏出液约240mL时，停止蒸馏，并用10mL无酚水冲洗冷凝管，洗涤液并入馏出液中（蒸馏过程中保持酸性）。蒸馏液应尽量避免与橡胶制品接触（橡皮塞、橡胶管和乳胶管里含有酚类化合物添加剂），如需使用时用硅胶管（塞）代替。

5. 2. 2 显色

将馏出液移入分液漏斗中，加2.0mL缓冲溶液，混匀。加1.5mL  4-氨基安替比林溶液，混匀，再加1.5mL铁氰化钾溶液，充分混匀后，放置10min。

5. 2. 3 萃取

准确加入10.0mL  三氯甲烷，密塞，剧烈振摇2min，静置分层，彻底澄清透明后（不能存有气泡），用干脱脂棉拭干分液漏斗颈管内壁，于颈管内塞入一小团干脱脂棉，将三氯甲烷通过干脱脂棉团，弃去最初滤出的数滴萃取液，直接放入光程为1cm的比色皿中。安替比林染料用三氯甲烷萃取后，需6h以内测定。

5. 2. 4 测定

于460nm波长下，以空白三氯甲烷萃取液为参比，用分光光度计测量吸光度。

5. 2. 5 标准曲线绘制

取8个分液漏斗，分别加入100mL水，依次加入0mL、0.5mL、1.0mL、3.0mL、5.0mL、7.0mL、10.0mL、15.0mL苯酚标准溶液，再分别加无酚水至250 mL，显色、萃取后，测定吸光度绘制标准曲线。

6 分析结果的表述

试样中挥发酚的含量按式（1）计算。

式中：

X    ——试样中挥发酚的含量（以苯酚计），单位为毫克每千克（mg/kg）；

m1 ——由标准曲线求得试样溶液中苯酚的量，单位为微克（μg）；

m0 ——空白的苯酚量，单位为微克（g）；

m   ——试样质量，单位为克（g）。

计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留2位有效数字。

7 精密度

在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

8 检出限

本方法检岀限：0.05mg/kg。

 

 

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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