7 测定步骤

7.1 样品处理

7.1.1 试样制备

按照SC/T 3016 的规定执行。

7.1.2 提取

准确称取已捣碎的样品(10±0.05)g，置于50mL离心管中，加入7g提取剂1(4.14)及10mL提取剂2(4.16)，涡旋混合后于40°C摇床振摇或超声30min，于6000r/min离心10min，取出上清液于另一50mL离心管中；再加入10mL提取剂2(4.16)，重复提取一遍，合并提取液。

7.1.3 衍生化

于7.1.2提取液中，加入衍生化试剂(4.18)0.5mL混匀后，于40°C摇床振摇或超声60min，取出冷至室温。

7.1.4 萃取

将冷却后的上清液用10mol/L和1mol/L的氢氧化钠调pH到7.0±0.1，加入15mL乙酸乙酯萃取，4000r/min离心10min后，取出乙酸乙酯层于梨形瓶中，再加入10mL乙酸乙酯，重复上述操作2次，合并乙酸乙酯层，于35°C水浴中减压旋转蒸发至干，加入5%的甲醇溶液(4.5)5mL溶解残渣。

7.1.5 净化

将净化柱(4.22)依次用5mL甲醇、5mL水活化后，加入7.1.4最终溶液以1mL/min〜2mL/min速度过柱，待样液全部过完后加5mL水淋洗，抽干，弃去流出液，用2mL甲醇以1mL/min~2mL/min速度洗脱，接收全部洗脱液，40°C氮气吹干。残留物用1.0mL乙腈溶液(4.3)及2mL异辛烷溶解，振荡混匀，6000r/min离心10min，取下层乙腈水层过0.22μm有机相微孔滤膜，供高效液相仪器测定。

7.2 工作曲线

移取适量AMOZ、AHD、AOZ、SEM混合标准溶液，添加到10mL提取剂2(4.16)中，使其浓度分别为0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL和50.0ng/mL，按7.1.3~7.1.5测定步骤处理，用高效液相色谱仪测定，绘制标准工作曲线。或釆用与待测物相近浓度的标样进行单点测定。

7.3 色谱测定

标准工作溶液和样液中的AMOZ、AHD、AOZ、SEM响应值均应在线性范围之内。在上述条件下，空白试样、标准溶液和加标样品的色谱图参见附录A。

8 计算

样品中AMOZ、AHD、AOZ、SEM的含量按式(1)计算。计算结果需扣除空白值，结果保留3位有效数字。

式中：

C—样品中被测物含量，单位为微克每千克(μg/kg)；

Cs——上机测定时的标准溶液中被测物的含量，单位为纳克每毫升(ng/mL)；

A——被测样品的峰面积；

As——标准的峰面积；

V——样品最终定容体积，单位为毫升(mL)；

m——样品质量，单位为克(g)。

9 方法灵敏度、准确度和精密度

9.1 灵敏度

本方法AMOZ、AHD、AOZ、SEM的检出限为0.5μg/kg，最低定量限均为1.0μg/kg。

9.2 准确度

本方法在0.5ng/mL〜50ng/mL范围内，AMOZ、AHD、AOZ、SEM的回收率均为70%〜110%。

9.3 精密度

本方法批内和批间相对标准偏差≤15%。

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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