喜树（Camptothecaacuminate）为山茱英目（Cornales)琪桐科（Nyssaceae）植物，落叶乔木。广泛分布于我国长江流域及西南各省和印度部分地区，资源丰富。由于喜树碱作为一种拓扑异构酶工的抑制剂，具有抗癌活性，目前已成为临床治疗中广泛使用的抗癌药。随着抗癌药物需求的增加，人们开始尝试利用植物细胞培养的方法生产喜树碱。但是，由于组织培养所产生的喜树碱不同，含量低，因此，建立高效、灵敏、特异的分析检测方法非常必要。液一质联用技术是集HPLC高效分离性能和MS特异的定性和定量功能于一体，具有高灵敏、特异性强等优点。为此，通过对色谱及质谱条件的优化，建立了液一质联用分离测定细胞培养提取物中喜树碱及其衍生物的可靠方法。

1．液相色谱条件

色谱柱：SymmetryC182.lmm×150mm,5ttm；流速：0.5mL/min；流动相：A液为水（含0.1%醋酸），B液为乙腈（含0.1%醋酸），梯度洗脱程序：从20%B开始，20min后升至50%B，至21min时返回至20%oB。

2.质谱条件

检测方式：电喷雾正离子检测，电离电压：2.3kV；电喷雾接口干燥气（N2）流速：300L/min，锥孔电压：45V；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：350℃。

3.样品的处理

取培养细胞50g，加入l00mL甲醇匀浆；超声提取10min，离心10min(1700g)，收集上清液，再加入100mL甲醇，重复超声提取、离心，合并两次上清液，浓缩至干，再用2mL二氯甲烷溶解，并加水2mL，离心10min，取二氯甲烷层浓缩至干，加0.5mL甲醇溶解待测。

4.结果与讨论

用本法对细胞培养过程中的2个样品进行了跟踪检测，1号含喜树碱24ng/g,10-羟基喜树碱未检出；2号含喜树碱31ng/g,10-羟基喜树碱2ng/g（均以细胞干重计）。结果表明，用所建立的方法，测定细胞培养产生的喜树碱和羟基喜树碱特异性强，不受培养基质的干扰，结果准确可靠。