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10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-deacetylbaccatinⅢ)是从红豆杉短枝叶中提取、分离得到的一种紫杉烷二萜类化合物,不但自身有抗癌活性,而且是生物合成与化学半合成紫杉醇的前体化合物,是目前用于临床治疗和科学研究紫杉醇的重要前体化合物。因此,掌握10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ在细胞培养物中的代谢情况是通过细胞悬浮培养生产紫杉醇的关键,为此建立了云南红豆杉(Taxusyunnanensis)细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的测定方法,为进一步探讨10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ在细胞培养物中的代谢研究提供依据。
1.色谱条件
SpherisorbCls色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-水(42:13:45),检测波长为234nm,流速1.0mL/min,柱温为32℃,进样量为10μL。
2.供试品溶液的制备
精密称取样品粉末0.5g加到100mL容量瓶中,加入20mLCH3OH,超声处理30min,浸泡24h,过滤,滤渣分别用l0mLCH3OH按此步骤重复处理两次,合并三次提取的滤液,30℃水浴浓缩,加入乙酸乙酯-5%NaHCO3(1:1)40mL萃取,收集乙酸乙酯层,水层分别再用l0mL乙酸乙酯萃取两次,合并三次萃取的乙酸乙酯层,30℃水浴浓缩挥干溶剂,用5mL甲醇定容,0.45μmPTF微孔滤膜抽滤,HPLC测定10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量。
3.结果与讨论
云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酞巴卡亭Ⅲ含量为0.02347%,平均回收率为100.6%,变异系数(RSD)为2.2%。研究表明,该方法能准确、快速测定云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酞巴卡亭Ⅲ含量,为探讨10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ在细胞培养物中的代谢研究提供测定方法。
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