长春胺（vincamine）为夹竹桃科蔓长春花属Vinca多年生藤本植物小蔓长春花V.minor中一种单萜吲哚生物碱。作为脑血管扩张剂，长春胺能使冠状动脉血流量增加，并选择性地作用于脑小血管和毛细血管，对心脑血管循环不全所引起的各类疾病和功能障碍有治疗、改善作用。小蔓长春花为多年生藤本植物，全草人药，国内外对小蔓长春花的研究主要集中于成分分析、药理作用、栽培措施等方面，关于组织培养方面的研究报道较少。对小蔓长春花不同部位愈伤组织诱导的调控，及其愈伤组织中长春胺含量测定鲜见报道。为此，就培养基中植物生长物质对小蔓长春花不同部位愈伤组织诱导、生长的影响及其长春胺含量变化、无菌植株中长春胺含量变化进行研究，为建立高效的长春胺离体生产体系提供技术基础。

1.色谱条件

InertsilODS-3色谱柱（4.6mm×150mm,5p.m)；流动相甲醛-1％二乙胺（pH7.5)(65：35)，流速1.0mL/min，检测波长279.5nm，柱温30℃，进样量20μL。

2.样品溶液的制备

分别称取不同时期无菌植株，诱导培养、继代培养中不同外植体的愈伤组织各lg。石油醚（沸程60-90℃)30mL,70℃热回流3次，每次lh后挥干石油醚。分别加甲醇（乙醇、氯仿）50mL后室温超声30min（室温冷浸24h,80℃索氏提取5h)，回收甲醇（乙醇、氯仿）至干，1mol/L盐酸溶解过滤后调pH至9.01氯仿抽提，将氯仿浓缩至干，色谱甲醇定容至10mL，以0．45μm微孔滤膜过滤。

3.结果与讨论

采用HPLC分别对组织培养物中的长春胺含量进行测定，无菌植株生长20d、40d、60d时，长春胺分别为（0.015±0.003)%、(0.097±0.001)%、(0.113±0.06)%；诱导培养、继代培养至30d时，小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织长春胺分别为（0.024±0.0025)%、(0.016±0.0015)%、(0.010±0.0015)%、(0.041±0.002)%、(0.019±0.001)%、(0.016±0.002)%。结果表明，诱导小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织形成的最适培养基为MS+2,4-D1.0mg/L-{-6BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L。不同生长期无菌植株中长春胺含量差异显著，源于不同外植体的愈伤组织中的长春胺含量不同，其中叶诱导的愈伤组织长春胺含量显著高于茎、根产生的愈伤组织。