(1)原理  有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚(indole）和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰叫噪。但并非所有微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测的指标。

色氨酸几乎存在于所有蛋白质中，有些细菌如大肠埃希氏菌、变形杆菌等可以将色氨酸分解为吲哚，吲哚养基中的积累可以由Kovacs吲哚试剂（Kovacs'reagent)检测出来，形成红色的玫瑰吲哚。试验操作必须在48h内完成，否则吲哚进一步代谢，会导致假阴性的结果。如梭菌属能产生吲哚，但很快被破坏，造成假阴性。色氨酸酶活性最适pH值范围是7.4-7.8,pH值过低或过高，产生吲哚少。易出现假阴性。另外，本反应在缺氧时产生吲哚少。若加少量乙醚或二甲苯，摇动试管可以提取和浓缩，使其浮于培养液表面，便于试验观察。

Kovacs吲哚试剂包含三种成分，即盐酸、异戊醇和对二甲基氨基苯甲醛。异戊醇用于浓缩分散在培养基中的吲哚；对二甲基氨基苯甲醛可以和叫反应形成红色的化合物，该反应必须在酸性条件下完成，盐酸的作用就是制造酸性环境。一旦指示剂的颜色变为红色，就表明吲哚验为阳性。

(2）培养基色氨酸肉汤或蛋白胨水培养基。配制蛋白胨水培养基，所用的蛋白胨最好用含色氨酸高，如用胰蛋白酶水解酪素得到的蛋白陈中色氨酸含量较高。培养基中不能含葡萄糖。因为产生吲哚的细菌大多能发酵糖类，利用糖时则不产生叫噪。

(3)试验方法常用方法有三种。

①将待试斜面纯培养物少量接种到色氨酸肉汤中，在（36士1)℃培养24-28h（必要时可以培养4-5d)，加Kovacs吲哚试剂0.5mL，轻轻振摇试管（国家标准就采用此法）。

②按照无菌操作，将被检菌接种于蛋白陈水培养基中，37℃培养48h后，取出试验管，在培养基中加人1-2ml乙醚，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚层中，然后沿管壁缓缓加人10滴Kovacs试剂，加人Kovacs试剂后切勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响观察。

实验证明吲哚试剂可与17种不同吲哚化合物作用而产生阳性反应，若先用二甲苯或乙醚等进行提取，再加试剂，则只有吲哚或5一甲基吲哚在溶剂中呈现红色，因而结果更为可靠。

③快速检验法，称取1g对二甲基氨基肉桂醛，溶于10mL10%盐酸溶液中。用滤纸润湿该试剂，上面放一菌环菌落培养物，产生吲哚者30s内变红。

(4）结果加人Kovacs试剂后，两者液面接触处培养基出现红色为阳性（＋）；培养基液面呈黄色为阴性（-）；记录呈橘色和粉色变化的中间型为±反应。

(5）应用吲哚试验是用来检测吲哚的产生，可用于肠道杆菌的鉴定。