(1)检验程序ISO 4831:2006的检验程序如图3-11.

(2)检测方法及计数

①接种与培养：选择合适的三个稀释度，当1mL<X<10mL时，将XmL试样（液态）或均质液（其他产品）转移到含有10mL的双料增菌液的试管中；当X<1mL时或转移至含有10mL的单料增菌液的试管中。通常每个稀释度接种3支试管。

将双料培养基的试管放入30℃或37℃的培养基中培养（24±2)h。培养好的试管中接种一环菌液到BGLB试管中，置于30℃或37℃中培养（(24±2)h，如果在这个阶段未见气体生成，则培养至（(48±2)h。

将单料培养基的试管放入30℃或37℃的培养箱中培养（24±2)h，如果既无气体又无不透明物生成，则放入培养箱再培养24h。从出现产气或不透明物产生的试管中接种一环菌液到BGLG的试管中，置于30℃或37℃中培养（(24±2)h，如果在这个阶段未见气体生成，则培养（48±2) h。

上述从双料或单料培养基中转接到BGLB培养基中的任何一管，只要在（24±2)h或(48±2) h培养出现产生气体的被判断为阳性。

②计数方法（MPN法）：根据检验结果，查表3-5、表3-6直接得到大肠菌群的MPN值。

表3-5 10管系列MPN测试值及95%可信范围计算参考表

表3-61S管系列MPN测试值及95％可信范围计算参考表

(3)注意事项

接种时通常每个稀释度使用3支试管，但是对某些产品和／或需要更精确的结果时，可能需要接种的试管会超过3支（比如5支），并进行MPN的计算。

加样时，首先拿3只双料增菌液试管，使用一个杀过菌的移液管将10mL的液体试样或10mL的均质液转移到这些试管中。然后拿三支单料增菌液试管，使用一个新杀过菌的移液管，往每支试管中加入1mL液体试样或固体的均质液。对于每个其他的稀释度，继续按单管的操作，

对于每个稀释度，计算最终观察到的产气管（阳性管）总的数量（在24h±2h或48h±2h后）。根据计数结果指出在Xg或XmL产品试样中大肠菌群存在或不存在。从每个稀释度的阳性管数计算MPN值。