一、生物实验注意事项

1．实验室器皿的洗涤和灭菌

(1)玻璃器皿的洗涤

①新的玻璃器皿：因含有游离碱，应先在20%盐酸内浸泡数小时。用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗1～2次沥干。

②含油脂的试管：凡沾有凡士林或石蜡的试管，应单独高压灭菌洗涤，以免沾污其他玻璃器皿。从高压灭菌器内取出沾有油脂的试管后立即将棉球塞拔出，趁热倒去污物，然后将试管倒置于铺有粗吸水纸的铁丝筐内，置100℃烘箱内烘半小时，取出后放入5%碳酸氢钠水中煮两次，最后用肥皂水及蒸馏水刷洗干净。

沾有凡士林或石蜡的其他玻璃器皿，如平皿等亦须照上法处理。

③培养细菌的试管：先经高压蒸气灭菌，趁热倒出其中的培养基，置热水中用5％肥皂水刷洗，再冲净，最后用蒸馏水冲洗1～2次沥干。

④培养细菌的平皿：有细菌生长的培养皿，可将底盖分开，直接投入5%碳酸氢钠水中，煮沸30 min灭菌，或放在搪瓷桶中，经高压蒸气灭菌（不宜直接将平皿置高压蒸气灭菌器内，以免琼脂融化流出培养皿外，阻塞高压蒸气灭菌器的蒸气孔）。灭菌后，趁热倒出平皿内溶物，用热肥皂水刷洗，最后用自来水及蒸馏水冲净。烤干或晾干后，底盖相配备用。

⑤吸管及移液管：可将染菌吸管投入3％来苏尔溶液内浸泡30 min。来苏尔溶液不仅能杀菌，还有清洁作用。再用肥皂水洗涤一次，最后以清水及蒸馏水冲洗干净。吸过血清的吸管，若无病菌污染，可立即投入清水中浸泡，或直接用自来水及蒸馏水冲洗即可。

⑥玻片及盖片：用过后，分别浸入5％来苏尔溶液或清洁液中过夜，取出后水洗。盖片用软布擦干即可。用于细菌染色之载物玻片须放入5％肥皂水中煮沸10 min，然后用毛刷沾肥皂刷洗，再经清水冲净，最后浸入95％酒精片刻，取出用软布擦干，保存备用。

⑦染色瓶：将沾有染料的染色瓶浸入5％漂白粉液或清洁液中24 h，然后用自来水及蒸馏水冲洗，干燥后备用。

⑧滤菌器：已用过的蔡氏滤菌器，如沾染传染性物质，应将滤菌器先浸于不使蛋白凝固的消毒剂如来苏液内以灭菌，然后用清水刷洗干净，蔡氏滤板经用过一次后即不能再用，应处理后丢掉。

⑨新购置的玻璃滤菌器：使用前需以酸溶液处理，然后用蒸馏水冲洗、抽滤，干燥后保存备用。使用后如未附有病原微生物，可直接用蒸馏水冲洗去除沉淀物，必要时也可用其他溶液，如脂肪沉积物可用四氯化碳溶液，其他有机物质的沉积物可用清洁液浸泡4～5 h后，再以蒸馏水冲洗和抽滤干净，干燥后备用。

(2）玻璃器皿的灭菌

①湿热灭菌：高压蒸气灭菌是应用最广的湿热灭菌方法，它是在高压蒸气灭菌锅中进行的。手提式高压蒸气灭菌器，使用方便，适用于一般细菌监测实验室使用。其操作方法及注意事项如下：打开锅盖或从加水口处向锅内加入适量的水。加水后，将待灭菌器皿放入锅内，不要塞得过紧，以使锅内温度均匀，再将锅盖盖好，拧紧螺旋，使其密闭。

加热使压力升至29 419.95～49 033.25 Pa时，打开放气阀，让锅内冷空气充分逸出。不然，锅内温度达不到压力表所指示的对应温度，使灭菌不彻底。当压力表指针降回“0"位时再行关闭，待锅内蒸气压上升至所需压力时，控制热源，维持所需时间，表压一般为98 066.5 Pa，保持20 min。

②干热灭菌：实验室中常用的还有热空气灭菌的方法，即将洗净干燥的待灭菌器皿均匀放入恒温干燥箱内，但不得与内层底板直接接触。关闭箱门，开启电源开关，用恒温调节器，使温度上升至160～170℃，维持2h，即可达到灭菌的目的。灭菌完毕后，须关闭电源，待温度降至50℃以下时，方可开门取物，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。