细胞培养常用试剂主要包括分离组织和分散细胞用的细胞分离液（消化液）、调整培养液酸碱度的pH调整液、防止培养过程中发生污染的抗生素溶液、指示酸碱度（pH）的酚磺酞溶液、检查细胞和观察研究细胞用的各种染液等。

（一）细胞分离液（消化液）

常用的细胞分离液有胰蛋白酶、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）和胶原酶等，它们在制备原代细胞时可消化组织、分散细胞，在细胞传代时使细胞脱离生长表面（瓶壁）和使细胞团离散成单个细胞。它们可以单独使用，也可按一定比例混合使用，这主要取决于所培养细胞的要求。

1．胰蛋白酶

(1)胰蛋白酶的性质：胰蛋白酶主要来自牛或猪的胰腺，是一种淡黄色粉末，易潮解，应放置冷暗干燥处保存，主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞离散。胰酶的活性是用水解酪蛋白的能力表示的，经常使用的有1 125和1 :250两种，即表示其活性为1份胰酶分别能解离125份和250份酪蛋白。胰蛋白酶的离散作用与细胞的种类和特性密切相关。不同细胞系对胰蛋白酶的作用浓度、温度和时间等的要求也不一样。一般来讲，浓度大、温度高、作用时间长对细胞的分离能力也越大，但超过一定限度也会损伤细胞。胰蛋白酶在pH 8.0,温度37℃时，作用力最强。此外，许多学者认为Ca²⁺，Mg²⁺的存在和血清、蛋白质的存在会降低其活力，所以可用无Ca²⁺、Mg²⁺的BSS溶液配制，需要终止消化作用时，可加人一些血清或含血清的培养液，或胰蛋白酶抑制剂来终止胰酶对细胞的继续作用。

实际使用中，常用的是较为粗制的混合型胰蛋白酶，如需离散某些特定组织，可选用纯化的各种亚型的精制胰蛋白酶产品，但价格较为昂贵。

(2) 1％和0.25%胰蛋白酶溶液的配制方法：

1）将D-Hanks液或Dulecco溶液用5.6% NaHCO₃调至pH 7.2左右。

2）称取胰蛋白酶粉末1克于烧杯中，选用少许平衡盐溶液调成糊状，再补足至l00ml,搅拌均匀，置室温4小时或冰箱内过夜，并不时搅拌振荡。

3)选用滤纸过滤，再用无菌玻璃滤器（G₆）或蔡氏滤器（EKS₂,EKS₃）滤过除菌，按5 ml（或l ml)量分装小瓶，盖紧瓶盖，置低温冰箱保存备用。

4）临用时将其用D-Hanks液或Dulecco溶液稀释成1：4（即1份胰酶加3份BSS)，即得到0.25％的胰蛋白酶溶液。胰酶溶液较酸，使用前再用5.6％的NaHCO₃调pH至7.2左右。

2．乙二胺四乙酸二钠（EDTA)EDTA是一种化学鳌合剂，其溶液又称Versene，对细胞有一定的解离作用，并且毒性小、价格低廉、使用方便。使用浓度一般为0.02%，但某些细胞株要求较高浓度。用无钙、镁盐溶液溶解后，高压灭菌，分装小瓶，于室温或4℃冰箱保存。

3．胰蛋白酶-EDTA消化液将胰蛋白酶和EDTA联合使用，分散细胞的效力会更高。用无钙镁盐溶液溶解胰蛋白酶和EDTA使终浓度分别为0.25％和0.02%,滤过除菌，分装小瓶于-20℃保存。使用时一瓶最好一次用完，不宜反复冻融。

4．胶原酶（collagenase）胶原酶是从溶组织芽抱梭菌（clostridium histolyticum）等细菌的培养液中分离得到的一组对胶原蛋白有较强水解作用的酶。胶原蛋白富含甘氨酸、羟脯氨酸，普通的蛋白酶对之水解力弱，因此对于富含甘氨酸、羟脯氨酸的组织细胞，进行细胞分散时需用胶原酶。胶原酶的活力是用其对人工合成肽（如FALGPA, furytacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala）的水解单位来表示。胶原酶种类较多，不同生化试剂公司产品的种类、纯度、酶活性都有一定差异，如何选择使用可根据所要消化的组织特点，并参考文献资料的成功经验及产品使用说明来确定。如用于组织培养的胶原酶有：Collagenase I A, XI具胶原酶、芽抱梭菌肽酶及中性蛋白酶活性，CollagenaseⅦ具胶原酶活性。从溶组织芽孢梭菌培养液中分离的Collagenase A,B,D等适合于消化多种组织细胞；Collagenase H则适合于制备内皮细胞；Collagenase P适合于制备脂肪细胞。联合使用来源于溶藻弧菌／多黏芽抱杆菌(vibrioalginolyticus/bacillus polymyxa）的collagenase/dispase，亦可消化多种组织细胞。胶原酶一般配成10倍贮存液，使用前作10倍稀释，使用浓度一般为1～5 mg/ml。具体浓度及配制要求可参照文献及产品说明书。