为了营养成分稳定和延长贮存时间，在配制营养液时不预先加入NaHC0₃，而在使用前再加入。因此NaHC0₃都是单独配制，高压灭菌。此外，为了维持培养液恒定的pH，以利于细胞的生长和增殖，还可利用HEPES强缓冲液。

合成培养基大都呈弱酸性，而细胞生长的最适pH为7.0～7.2，可忍耐的pH范围是pH 6.6～7.8. pH到7.6时，细胞虽有代谢但不再分裂增殖，故使用培养基时要调整pH,并注意培养过程中的pH变化，以及时换液。常用的pH调整液NaHC0₃,HEPES等配制

如下：

1. NaHC0₃溶液常用的浓度有7.4%,5.6%,3.7％三种。配制时用三蒸水溶解后，滤过除菌，分装小瓶，盖紧瓶塞，于4℃或室温保存。有的实验室用68 kPa 10分钟高压灭菌，虽有部分NaHC0₃被破坏，但操作简单方便，调节pH时，NaHC0₃要逐滴加入，并不时摇动培养液，以防止加入过量。当pH过高后，可用灭菌的10%醋酸溶液或通入C0₂气体调节。

2. HEPES为了较长时间恒定pH，可使用缓冲能力较强的HEPES ( N-2-hydroxyeth-ylpiperazine N' -2-ethanesulfonic acid, N-2-羟乙基哌嗪-N’-乙磺酸），使用的终浓度为10～50mmol/L，可以根据缓冲能力的要求而定。

HEPES的分子式为：C₈H₁₈0₄N₂S，分子量为238. HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000m1培养液中加入2.38g HEPES，待溶后用1 mol/L NaOH调pH至7.0～7.2，滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10mmol/L。亦可配成100×贮存液（1 mol/L )，使用前取99 ml培养液加入1 ml贮存液，最终浓度仍为l0mmol/L,1mol/L (100 ×) HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于100m1双蒸水中，用1 mol/L NaOH调pH至7.0～8.0后，过滤除菌，分装小瓶（2ml/瓶）,4℃或-20℃保存。

抗生素

培养物的污染会使其变得模糊不清，污染微生物的生长完全会压到，甚至杀死培养物的细胞，使细胞培养及其实验失败。在用人体和动物组织材料分离或培养细胞的过程中，污染可能性很高，在这种情况下于试液中加入适量抗生素，可预防操作不慎而产生的污染。但在细胞培养物是“干净”的情况下，我们不推荐常规地应用抗生素，也不主张用于细胞库的运作中。常用的抗生素有青霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、两性霉素B等。常配成100倍或200倍于使用浓度的盐溶液内，分装小瓶，冷冻保存。使用前加入到培养液内，每小瓶最好一次用完。各种抗生素的用量及抗菌范围见表1-7。

1．配制以青霉素、链霉素为例，配制如下：

取青霉素（钠盐）100万IU和链霉素（双氢）1g(100万ug）溶于无菌三蒸水100m1，每毫升含青霉素10000IU，链霉素10 000 ug。

2．保存分装小瓶，-20℃冰冻保存。

3．使用99 ml培养液中加入青霉素、链霉素混合液1 ml，最终浓度为青霉素100U/ml,链霉素100 ug/ml。

使用金霉素时须预热37℃的三蒸水溶解呈清澈的琥珀色。制霉菌素几乎不溶于水，故配制成混悬液。

L-glutamin溶液

制备：L-glutamin（分子量146.15)6g

三蒸水 200m1

1.滤过除菌。

2．分装。

3.-20℃冰冻保存。

4.使用时每l00ml培养液加1ml。