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流式细胞分选术

发布时间:2017-03-09 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1177

流式细胞仪(flow-cytometer, FCM)是对单个细胞及细胞中DNA,RNA和蛋白质理化性质进行快速测量的自动分析、分类收集的高技术。用荧光染料分离细胞的流式细胞仪也称为荧光激活细胞分选器(fluorescence activated cell sorter, FACS )。该技术是将流体的喷射技术、激光技术空气计数、,γ一射线能谱术及电子计算机等技术与显微荧光光度计密切结合的仪器。该仪器可以在细胞大量密切贴近的情况下用定量方式测定多重荧光及物理特性记录和储存。利用这些信息系统可以测定每单个细胞的大小、密度,并依赖荧光染色,测定DNA和蛋白质的含量。检测细胞及组分的多种参数(结构参数、功能参数),其数据准确可靠,具有高度的精密度,既可分析单个细胞,也能区别群体细胞;检测的速度可高达5000个/秒,分选纯度高达99%。

随着计算机科学、激光技术、流体力学、单克隆抗体制备、定量细胞化学和定量荧光细胞化学等方法和技术的应用而日益完善,FCM检测分析对象范围越来越大,几乎对所有生物都适用,如免疫复合物、病毒、脂质体、细胞器、原核细胞、真核细胞以及某些简单得多细胞生物。目前,流式细胞术主要用于细胞的定性、定量研究,表3-7列举了FCM可测量的各种细胞参数。由于该仪器的多参数性、准确性、快速性及分选的高纯度性,在细胞生物学、免疫学、肿瘤学、病理学及临床医学等领域得到越来越广泛的应用。

一、流式细胞仪的结构及工作原理

1.结构流式细胞仪通常是由光学台、电子控制台和数据储存处理计算机三大部分构成,可分为四个系统,即①细胞流动室(液流系统:样本流、鞘流);②光源和聚光装置(光学系统:激光光源、分光镜、滤片、散射光、聚光装置和光探测器);③信号检测器(分选系统:压电晶体,液流成滴系统,加电系统和偏转系统);④电子计算机(数据处理系统:光电检测元件和模拟数字转换器,光信号一数字信号、存储)。

2. FCM的工作原理各类流式细胞仪的基本原理都是依据250年前Bernoulli和Euler实验原理而设计的。先将标本制成单细胞悬液,经过荧光染料染色后,进入液流系统,细胞排成单行,通过高速流动的液流系统,经过检测区,荧光染料染色的细胞经激光照射产生散射光信号和荧光信号,这些信号由光电倍增管接受,转换成脉冲信号,经过计算机分析整理后,形成细胞理化特征分析图,并进一步进行各种分析。经过检测区的细胞还可以在收集系统中被分别收集。

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